《飼用植酸酶活性的測定——分光光度法》新舊國標變化及解讀二

kiroco

由于相對法使用的植酸酶標準品不易確定和不易采購，新標準刪除了相對法，但由于絕對法對環境、設備條件要求較高，為了降低不同化驗室間檢測結果的誤差，必須使用新標準8.2.2中的建議：“在測定樣品時附加一個已知活性的植酸酶參考樣，便于檢驗整個操作過程是否有偏差?！睂τ谠趪鴥仁褂玫闹菜崦竻⒖紭討讷@得國家權威質量監督部門授權的國家級實驗室間進行重復測定；如果是在國際范圍使用的植酸酶參考樣，則要在不同國家的權威實驗室間進行重復測定。

4 改變了緩沖溶液的配制方法

4.1 標準中使用無水乙酸鈉代替原標準中的三水乙酸鈉

4.2 用曲拉通X-100和牛血清白蛋白代替吐溫20做為增溶劑

因吐溫20只對少數一兩類特定的植酸酶浸提效果較好，但由于目前市場銷售的植酸酶菌種和生產工藝的不同，各單位檢測中使用的玻璃器皿質量的不同等原因，使得大部分植酸酶使用吐溫20增溶效果較差，檢測中部分植酸酶會附著在容量瓶和試管壁上，因此，用曲拉通X-100和牛血清白蛋白（BSA）代替吐溫20作為增溶劑配制緩沖液，檢測結果重復性較好。

5 其他區別：細化了測定過程中的操作步驟

5.1 明確了植酸鈉的相對分子質量和純度，細化了溶液的配置

底物溶液的配制中新標準規定：先用冰乙酸調節pH值5.5±0.01后，再定容。以上步驟有效確保了植酸酶酶活定義規定的植酸鈉濃度為5.0 mmol/L和pH為5.5的反應條件。

5.2 緩沖液和植酸鈉溶液pH調節由原標準中使用“鹽酸調節”修訂為使用“冰乙酸調節”

5.3 細化了試樣的制備

新標準中對固體樣品和液體樣品分別進行了描述。

5.4 對制做標準曲線的稀釋順序進行了調整

新標準中標準溶液的配制使用了由低向高進行配制的方法，更好的確保標準溶液濃度的準確性。

5.5 細化了試樣溶液的制備過程

5.5.1 新標準對酶制劑樣品中酶的提取和加酶飼料樣品中酶的提取分別進行了描述。

5.5.2 原標準中對于酶制劑樣品中酶的提取僅使用“在磁力攪拌器中高速攪拌30min”提取方式，新標準增加了酶提取的新方案：“超聲波溶解器上超聲溶解15min，再放入回旋式振蕩器中振蕩30min。”用這兩種提取方式均可達到檢測要求。