如何檢測(cè)狗糧中肉類原料的新鮮度？

天師貓神 · 發(fā)表于 2011-4-1 20:47:57

幾種常見(jiàn)的動(dòng)物源性飼料中揮發(fā)性鹽基氮的測(cè)定
　　揮發(fā)性鹽基氮 total volatile basic nitrogen物質(zhì)，簡(jiǎn)稱TVBN。它是指肉蛋白質(zhì)在微生物的
作用下發(fā)生分解產(chǎn)生氨、胺類堿性含氮物質(zhì)，這類物質(zhì)易和有機(jī)酸形成鹽，具有揮發(fā)性，稱這類物
質(zhì)為揮發(fā)性鹽基氮物質(zhì)。肉中揮發(fā)性鹽基氮物質(zhì)含量的多少可以反應(yīng)肉品質(zhì)新鮮程度。
　　TVBN值：100克肉中所含揮發(fā)性鹽基氮物值的毫克數(shù)。該值是肉品新鮮度指標(biāo)。
　　國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：
　　一級(jí)鮮肉TVBN值≤15mg/100g；
　　二級(jí)鮮肉TVBN值15-25mg/100g；
　　腐敗肉TVBN值≥25mg/100g。
　　揮發(fā)性鹽基氮作為食品和水產(chǎn)品質(zhì)量的重要指標(biāo)，在近幾年才被應(yīng)用作為動(dòng)物源性飼料產(chǎn)品的
一個(gè)重要指標(biāo)，主要反映動(dòng)物源性飼料的新鮮度。
　　本試驗(yàn)通過(guò)參考GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》〔1〕，結(jié)合動(dòng)物源性
飼料產(chǎn)品的實(shí)際情況，建立一種適用于動(dòng)物源性飼料產(chǎn)品中揮發(fā)性鹽基氮含量測(cè)定的簡(jiǎn)便方法。
　　1、原理
　　動(dòng)物性飼料產(chǎn)品富含蛋白質(zhì)，由于微生物的作用易發(fā)生腐敗，使蛋白質(zhì)分解產(chǎn)生氨及胺類等堿
性含氮物質(zhì)，稱為揮發(fā)性鹽基氮物質(zhì)。此類物質(zhì)具有揮發(fā)性，用凱氏定氮法在堿性環(huán)境中將揮發(fā)性
鹽基氮物質(zhì)蒸餾出來(lái)后，用硼酸接收，再用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸滴定，計(jì)算含量即為TVBN值。
　　2、儀器與試劑
　　2．1儀器
　　實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)：刀片式高速粉碎機(jī)；分析天平：感量0.0001g；半微量凱氏蒸餾裝置：
水蒸汽蒸餾式；振蕩機(jī)；離心機(jī)；勻漿機(jī)；微量滴定管：最小分度0.01 mL。
　　2．2溶液的配制
　　2.2.1 c=0.01mol／L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（無(wú)水碳酸鈉標(biāo)定）：吸取分析純鹽酸1mL，用蒸餾水定容
至1000mL，標(biāo)定。
　　2.2.2 2%硼酸溶液：分析純硼酸2g溶于100mL水配成2%溶液。
　　2.2.3 混合指示劑：甲基紅0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，陰涼
處保存期三個(gè)月以內(nèi)。
　　2.2.4 1%氧化鎂溶液：分析純氧化鎂1.0g溶于100mL蒸餾水振蕩成混懸液。
　　2.2.5 防泡劑:不含氮、主成分為有機(jī)硅的固態(tài)或液態(tài)試劑。
　　3、測(cè)定步驟
　　3.1試樣的處理
　　按飼料采樣方法制備試樣, 要求粉碎細(xì)度能一次性達(dá)95%以上過(guò)CQ16(相當(dāng)于40目)篩，粉碎樣
品充分混合后（篩上、篩下的全部篩分范圍樣品）裝入磨口瓶中備用,在粉碎樣品時(shí)，磨膛不能發(fā)
熱。
　　稱取10g試樣(精確到0.0001g)于250mL具塞錐形瓶中，加蒸餾水100mL，振蕩搖勻30min。魚粉
和蠶蛹粉等原料采用過(guò)濾，濾液為樣液；而血漿蛋白粉、血球蛋白粉、魚溶漿等不易過(guò)濾的原料采
用離心，在離心機(jī)上于1 500g(大約3000r/min)離心10min，上液為試樣液。
　　3.2 蒸餾
　　取20mL2%的硼酸溶液于150mL錐形瓶中，加混合指示劑2滴，使半微量蒸餾裝置的冷凝管末端浸
入此溶液。
　　蒸餾裝置的蒸汽發(fā)生器的水中應(yīng)加甲基紅指示劑數(shù)滴，硫酸數(shù)滴，且保持此溶液為橙紅色，否
則補(bǔ)加硫酸。
　　準(zhǔn)確移取10mL樣液注入蒸餾裝置的反應(yīng)室中，用少量蒸餾水沖洗進(jìn)樣入口，再加入10mL1.0%的
氧化鎂溶液，不起泡的動(dòng)物源性飼料不加防泡劑，而易起泡的動(dòng)物源性飼料產(chǎn)品，例如血漿、血球
、血粉等必須滴加1g固體（或0.5ml液體）防暴劑，在入口處加水封好，防止漏氣，蒸餾4min，使
冷凝管末端離開(kāi)吸收液面，再蒸餾1min，用蒸餾水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。
　　3.3 蒸餾
　　吸收氨后的吸收液立即用0.01mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液滴定，溶液由藍(lán)綠色變?yōu)榛壹t色為終點(diǎn)，同時(shí)
進(jìn)行試劑空白測(cè)定。
　　3.4 結(jié)果的計(jì)算
　　揮發(fā)性鹽基氮（TVBN）含量以（mg/100g）表示。
　　ω=
　　式中: ω——樣品揮發(fā)性鹽基氮的含量，mg/100g；
　　V1——滴定試樣時(shí)所需鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，mL；
　　V2——滴定空白時(shí)所需鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，mL；
　　C——鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/L；
　　m：試樣重量，g；
　　14：與1.00mL鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液[c(HCl)=1.000mol/L]相當(dāng)?shù)牡馁|(zhì)量，mg。
　　4、結(jié)果與討論
　　4.1不同試樣制備方式對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響
　　4.1.1 不同粉碎粒度試樣對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響
　　分別取未粉碎的魚粉試樣，粉碎至40目、60目的魚粉試樣，按3的分析測(cè)試步驟進(jìn)行分析，每
種處理情況測(cè)試5次，測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表1。
　　表1 不同粉碎粒度、不同試樣處理方式對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響
　　振蕩30 min處理高速勻漿機(jī)10min處理
　　未粉碎 40目 60目未粉碎 40目 60目
　　揮發(fā)性鹽基氮,mg/100g 150.1148.3152.4147.5153.4 215.7221.4217.9218.5220.1
225.3219.8220.8223.4221.3 215.4214.8217.5216.8219.7 220.3219.8220.8217.5222.6
224.5221.3223.2222.6219.9
　　平均值，mg/100g 150.3 217.7 223.5 216.8 220.2 222.3
　　根據(jù)單因子方差分析，在（a＜0.05）,未粉碎處理的樣品與粉碎至40目和60目樣品存在顯著差
異；而粉碎至至40目和60目樣品處理差異不顯著。
　　4.1.2 不同試樣處理方式對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響
　　分別取未粉碎和已粉碎40目、60目魚粉試樣用高速勻漿機(jī)勻漿10分鐘，按3的分析測(cè)試步驟進(jìn)
行分析，測(cè)試結(jié)果見(jiàn)下表1。
　　根據(jù)單因子方差分析，在（a＜0.05）,三種處理方式差異不顯著。
　　4.2本方法的重復(fù)性
　　分別取魚粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉、血粉、膨化血粉等樣品，每個(gè)樣品測(cè)定6次，計(jì)算其
標(biāo)準(zhǔn)偏差及變異系數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表2。
　　表2 不同試樣揮發(fā)性鹽基氮（TVBN）含量測(cè)定的重復(fù)性
　　測(cè)定值，mg/100g 平均值mg/100g 標(biāo)準(zhǔn)偏差變異系數(shù)(%)
　　魚粉 215.7,221.4,217.9,218.5,220.1 217.7 2.175 1.00
　　血球蛋白粉1# 17.5,18.3,16.9,17.7,18.5 17.78 0.642 3.61
　　血球蛋白粉2# 101.5,103.7,104.8,102.4,105.2 103.5 1.567 1.51
　　血漿蛋白粉1# 15.2,13.9,14.6,15.6,16.1 15.08 0.858 5.69
　　血粉 554.7,537.1,547.0,558.3,571.3 553.68 12.771 2.31
　　膨化血粉 2215.2,2240.5,2198.7,2207.3,2168.9 2206.12 26.011 1.18
　　4.3本方法的回收率
　　在以上魚粉、血球蛋白粉中，按一定濃度的（NH4）2SO4溶液，按本方法進(jìn)行測(cè)試，每個(gè)梯度
重復(fù)測(cè)定五次，結(jié)果見(jiàn)表3。
　　表3 方法的回收率（n=5）
　　加入量測(cè)得均值平均回收率（%）
　　魚粉 50.0 267.3 99.20
　　 100.0 315.9 98.20
　　血球蛋白粉2# 50.0 153.6 100.20
　　 100.0 203.3 99.80
　　4.4 本方法與GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》半微量定氮法的比較
　　4.4.1本方法與GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》適用范圍的比較
　　本方法適用所有的動(dòng)物源性飼料產(chǎn)品的揮發(fā)性鹽基氮（TVBN）含量的測(cè)定；GB/T5009.44-2003
《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》半微量定氮法適用與魚粉、肉粉等不起泡的產(chǎn)品TVBN測(cè)定；微
量擴(kuò)散法適用低含量所有產(chǎn)品的TVBN測(cè)定，但測(cè)定時(shí)間較長(zhǎng)，方法較半微量定氮法煩瑣。
　　表4本方法與GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》適用范圍的比較
　　方法適用范圍不適用范圍
　　本方法魚粉、肉粉、血粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉、膨化血粉等無(wú)
　　GB/T5009.44-2003 半微量定氮法魚粉、肉粉等不起泡產(chǎn)品血粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉
、膨化血粉等
　　微量擴(kuò)散法魚粉、肉粉、血粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉膨化血粉等高TVBN含量產(chǎn)品
　　4.4.2本方法與GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》測(cè)定結(jié)果的比較
　　分別取魚粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉、血粉、膨化血粉等樣品，根據(jù)各方法的適用范圍采用
相應(yīng)的方法測(cè)定揮發(fā)性鹽基氮（TVBN）含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5。
　　表5 本方法與GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》測(cè)定結(jié)果的比較
　　單位：mg/100g
　　
　　本方法(n=5) GB/T5009.44-2003
　　半微量定氮法(n=2) 微量擴(kuò)散法(n=2)
　　魚粉 217.7 218.5 215.7
　　血球蛋白粉1# 17.78 / 17.9
　　血球蛋白粉2# 103.5 / 102.7
　　血漿蛋白粉1# 15.08 / 15.2
　　血漿蛋白粉2# 57.94 / 58.2
　　血粉 553.68 / 551.8
　　膨化血粉 2206.12 / /
　　計(jì)算表明，改進(jìn)后的測(cè)試方法與相適應(yīng)的試驗(yàn)方法的測(cè)定值不存在顯著差異，改進(jìn)后的測(cè)試
方法的測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
　　5、結(jié)論
　　本試驗(yàn)建立了動(dòng)物源性飼料產(chǎn)品中揮發(fā)性鹽基氮的含量的測(cè)定方法，該法建立動(dòng)物源性飼料
產(chǎn)品樣品處理、采用半微量蒸餾法直接測(cè)定氮含量，普通飼料企業(yè)常規(guī)質(zhì)量檢測(cè)條件下可以滿足，
具有提取效率高、易于操作等特點(diǎn)。通過(guò)研究表明：樣品經(jīng)粉碎處理，平均回收率可達(dá)98%以上。
該法針對(duì)幾種常見(jiàn)的動(dòng)物源性飼料揮發(fā)性鹽基氮的含量測(cè)定設(shè)計(jì)，與國(guó)標(biāo)法相比具有前處理簡(jiǎn)便、
回收率高的特點(diǎn)，同時(shí)具有重現(xiàn)性好、精密度高、操作簡(jiǎn)便、省時(shí)等優(yōu)點(diǎn)。
　　參考文獻(xiàn)
　　1 GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》
　　（摘）
　　