四川天添生物科技應用有限公司
補充天添對羅非魚攝糖能力的影響
摘 要：選用體重約25.0g 羅非魚（Oreochroµis niloticus）240尾，隨機分為4個處理組，每組60尾，設3個重復，每個重復20尾。設計了2組蛋白含量分別為33%和29%左右的等能商業飼料為對照組，并在蛋白31%和29%的分別補充1g/kg的“天添”，研究飼料中添加“天添”對羅非魚生長性能、體形和糖代謝酶等的影響。養殖試驗期30天，結果表明：以生產性能、形體指標、生化指標等為判定依據，飼料中補充“天添”，在低蛋白高糖日糧中有明顯的促長效果。以丙酮酸激酶等糖代謝指標為判斷依據發現，“天添”的添加增強了羅非魚對糖類物質的利用效率。
關鍵詞：“天添” 羅非魚 生長性能 糖代謝
前 言
魚類對糖利用能力是有限的，其利用能力的高低又隨魚的種類而異，一般草食性魚類和雜食性魚類對糖的利用能力較肉食性魚類高。分析其原因，草食性和雜食性魚類淀粉酶活性較高，并且分布在整個腸道；而肉食性魚類淀粉酶活性較低，僅僅在胰臟中可見到淀粉酶。從肝臟糖代謝酶活性看，肉食性魚糖原合成酶活性高，而糖分解酶活性低，因而對吸收的葡萄糖不能有效地利用，形成類似糖尿病的糖代謝。
對于魚類來說，糖具有節約蛋白質的作用，當蛋白質與糖一起被攝入魚體時，在魚體內儲留的氮比單獨攝入蛋白質時要多。糖類節約蛋白質的作用可能與葡萄糖是神經組織和血細胞的首選氧化底物有關，而魚飼料中糖的存在可抑制糖異生作用，由此減少氨基酸的氧化消耗。在實際生產中，對于不同的養殖品種，加入合適的糖，最終的目的就是為了使糖盡可能的代替蛋質成為能量物質，降低蛋白質轉化為能量的比率，從而降低飼料成本，以利于魚類的健康和取得更好的經濟效益。
本試驗設計了2種等能，不等氮的基礎飼料。在此前提下，補充一定量的“天添”，通過比較各處理組羅非魚生長性能和糖代謝指標等，初步判斷“天添”是否可以通過提高羅非魚對糖類物質的利用從而促進羅非魚的生長，為“天添”在水產飼料中的實際應用提供參考。
1 材料與方法
1.1試驗魚及試驗設計
試驗用羅非魚（O. niloticus）為當年人工繁殖的同一批苗種，購自重慶市銅梁縣溫泉漁場，試驗在西南大學水產系室內循環養殖系統中進行。試驗前暫養1周，每天早、中、晚飼喂對照組飼料3次至飽食。試驗采用的養殖設施為橢圓形玻璃缸(總體積0.4m3，水體體積0.25 m3)。循環流水系統，曝氣自來水，進水速率大約為0.8 L/min。
試驗開始前停飼24 h。選擇體重相近(25 g左右)、體格健壯的幼魚240尾，隨機分配于12個養殖缸（4個處理組，每個處理組3個重復，每重復20尾），其中處理組1對照組，處理組2、3、4為試驗組，“天添”添加量均為1 g/kg（見表1），其中組1和組2的基礎日糧一致，組3和組4的基礎日糧一致。本試驗所使用的“天添”由四川天添生物科技應用有限公司提供；使用時根據添加量用逐組稀釋的方法均勻混合于基礎飼料中。每天早、中、晚投喂3次，至飽食，投喂結束后30 min，吸出池內殘餌及糞便。試驗共進行30d，試驗期間水溫25.0±1.0℃，pH7.5±0.5，溶氧≥5mg/L，氨氮<0.2mg/L，余氯<0.1mg/L。
表1 試驗設計
組 別 1 2 3 4
飼料蛋白含量 33 33 29 29
“天添”
（g/kg飼料） 0 1 0 1
1.2 試驗飼料
配制飼料前，飼料原料均經粉碎機粉碎并全部過60目篩，制成直徑為1.5mm左右的顆粒飼料，在35℃鼓風干燥箱內干燥24 h，置冰箱0℃保存。具體配方組成和營養成分分析見表2。
1.3 檢測指標及分析方法
1.3.1 生長速度
以鮮重的羅非魚體重變化、增重率和特定生長率等表示生長速度。增重率(%)＝( Wt-W0) / W0×100%；特定生長率(%/d)＝[(LnW t-LnWo) / d]×100%，W0和Wt分別表示養殖開始和結束時的羅非魚體重（g）。
1.3.2 飼料利用效率
以餌料系數和蛋白效率表示，餌料系數=投喂飼料量/魚體增重量；蛋白效率=( Wt-W0) / F×P%，F指飼料消耗量，P%指飼料蛋白質含量。
1.3.3 形體指標
以肥滿度、內臟指數（內臟重與體重比）、肝胰臟指數（肝胰臟重與體重比）等指標對魚體形態進行評價。其中肥滿度=Wt / L3，L指對應體重的魚體長（cm）。
1.3.4糖代謝酶活性等指標測定
1.3.4.1糖代謝酶活性測定
所有肝胰臟樣品解凍后加10倍的4℃緩沖液，冰浴勻漿，制成10%勻漿液。緩沖液參照蔡春芳[3]的方法配制。4℃、4000 r•min離心10min，取上清液一部分立即用于測定己糖激酶（HK）活性；另一部分上清液繼續在4℃、12000r•min-1離心20min，取上清液用于測定丙酮酸激酶（PK）活性，室溫下24h測定完畢。標準蛋白為牛血清白蛋白（購于南京建成生物有限公司）。
表2 羅非魚飼料配方及營養成分表（%）
配方1 配方2
原料名稱 原料用量 原料用量
魚粉(CP62.5%) 8.00 8.00
大豆粕 22.00 3.80
菜籽粕 17.00 20.00
棉籽粕 17.50 20.00
米 糠 10.00 10.00
小麥麩 14.00 14.00
次 粉 3.00 10.50
面 粉 3.70 9.70
大豆油 1.00 1.00
磷酸二氫鈣 1.50 1.50
淡水魚維生素 0.10 0.10
淡水魚微量 0.50 0.50
氯化膽堿 0.15 0.15
Vc 酯 0.05 0.05
膨潤土 1.50 0.70
營養指標
粗蛋白 33 28.9
粗脂肪 4.37 4.33
無氮浸出物 34.16 40.2
粗纖維 6.87 7.74
粗灰分 7.8 7.8
鈣 0.8 0.79
總 磷 1.36 1.35
1、預混料中維生素部分(每kg配合飼料提供（µg））：VA：6000 IU/kg；VD: 2000 IU/kg；VE：50.0；VK：5.0；VB1：15.0；VB2：15.0；VB3：25.0；VB5：30.0；VB6：10.0；VB7：0.2；VB11：3.0；VB12：0.03。
2、預混料中礦物質部分(每kg配合飼料提供（µg））：NaCl：1.0；MgSO4•7H2O：15；NaH2P04•2H20：25；KH2PO4：32；FeSO4：2.5；乳酸鈣：3.5；ZnSO4•7H20：0.353；MnS04•4H20：0.162；CuSO4•5H2O：0.031；CoCl2•6H2O：0.01；KIO3：0.003。
3、Vc磷酸酯中Vc含量為25%。
己糖激酶（HK）活性測定采用G6PDH偶聯法，參照Tranulis等[4]和Panserat等的方法，但將葡萄糖濃度改為0.5mmol•L時測定，反應時間為5min。酶活性單位定義：在30℃pH8.2下，每克組織蛋白在本反應體系中每分鐘生成1mmol•L 的NADPH （輔酶Ⅱ，煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸）為一個活性單位。丙酮酸激酶（PK）活性測定參照Kirchner等和蔡春芳的方法。酶活性單位定義：在30℃pH7.4下，每克組織蛋白在本反應體系中每分鐘將1µmol的PEP（磷酸烯醇式丙酮酸鉀鹽）轉變成丙酮酸為一個酶活性單位。
1.3.4.2肝糖原測定
糖原測定采用蒽酮顯色法。A）可溶性糖的提取：在樣品中取0.4g肝，加入8ml三氯乙酸后放入離心機中離心15分鐘（3000轉/分），取上清液2ml加入6ml三氯乙酸，再在3000轉/分 條件下離心15分鐘，取上清液4ml并加入4ml的乙醇，靜置15分鐘后放入離心機中繼續離心15分鐘后將離心管小心翼翼的取出不要震蕩，將上清液去掉后的沉淀便為可溶性糖固體。B）顯色測定：將沉淀中加入8ml蒸餾水使之充分溶解后取1ml溶液于管中，并在試管中加入4ml的蒸餾水，將試管中5ml的溶液中取1ml于另外一只試管中，并加入4ml蒸餾水，在2支試管中加入蒽酮試劑（加入量為試管中溶液體積的2倍）。最后放入沸水中煮15分鐘，并流水冷卻，冷卻以后在620nm波長下測定吸光度。C）計算可溶性糖的含量：將測定的吸光度帶入標準曲線的公式中乘以800則為最后的糖含量（乘以800是因為所測的吸光度是溶液稀釋800倍以后的吸光度）。
肝糖原含量（mg.g-1）=（A+0.0021）/ 0.004×800 / 1000 / 0.4 （A為吸光度值）
1.3.5 數據分析
采用SPSS11.5統計軟件對數據進行統計學分析，先對數據作單因素方差分析(ANOVA)，處理間若有顯著差異，再作Duncan’s多重比較，P<0.05表示差異顯著。
2 試驗結果
2.1 對生長性能的影響
由表3可見，組1和3隨著飼料中蛋白含量的下降，羅非魚的增重率顯著下降，組3的增重率顯著低于其余各組（P<0.05）。低蛋白飼料中補充“天添”后，組4的增重率顯著高于組3（P<0.05），且與組1和2均無顯著性差異（P>0.05）。
特定生長率指標中，隨著飼料中蛋白含量的下降，羅非魚的特定生長率逐漸下降（組1和3），在低蛋白飼料（組3）中補充“天添”后，組4的特定生長率顯著提高（P<0.05），但與組1、2和4無顯著差異（P>0.05）。
飼料轉化效率方面各組間沒有顯著差異（P>0.05）。
飼料蛋白降低導致蛋白效率下降，補充一定劑量的“天添”后，蛋白效率有較為明顯的改善，組4的蛋白效率顯著高于組3（P<0.05）。
試驗各組的羅非魚成活率沒有顯著性差異（P>0.05）。
表3 “天添”對羅非魚生產性能的影響 n=3
增重率(%) 特定生長率 餌料系數 蛋白效率(%) 成活率(%)
(％/d)
組1 190.59±5.04a 1.91±0.05a 1.31±0.07a 2.34±0.17ab 100
組2 203.99±4.57a 2.02±0.07a 1.25±0.05a 2.48±0.14a 100
組3 162.57±7.58b 1.74±0.08b 1.38±0.08a 2.15±0.15b 100
組4 187.21±15.14a 1.84±0.11a 1.33±0.11a 2.43±0.14a 100
注：同列數據肩標字母相同表示差異不顯著（P>0.05），字母不同表示差異顯著（P<0.05）。除特殊情況外，以下各表同。
2.2對形體指標的影響
水產養殖對飼料質量的要求除了對水產動物生長速度和飼料利用率的影響，還對養殖魚體的形態特征也提出了要求，魚體體形不能太“臃腫”，也不能太瘦長。體形指標可以從魚的肥滿度、內臟指數（內臟重與魚體重比）等來進行初步判定。隨著飼料中蛋白含量的下降（組3），羅非魚的肥滿度相對組1顯著下降（P<0.05）。飼料中補充“天添”后，組4羅非魚的肥滿度得到有效改善，與組1和2無顯著差異（P>0.05）。
內臟指數和肝胰臟指數各組間無顯著差異（P>0.05）。
表4 “天添”對羅非魚的體型的影響 n=3
肥滿度 肝胰臟指數 內臟指數
組1 3.00±0.12a 2.04±0.33a 9.65±0.59a
組2 3.14±0.12a 1.63±0.16a 9.20±0.43a
組3 2.77±0.14b 1.84±0.19a 9.57±1.26a
組4 2.92±0.11ab 2.16±0.42a 9.76±0.77a
2.3 對糖代謝的影響
表5中可以看出，飼料蛋白含量的降低，及“天添”的補充（組4），對肝糖原的含量和肝己糖激酶（HK）的活性無顯著影響（P>0.05）。肝丙酮酸激酶（PK）活性隨飼料中蛋白含量的降低而逐步下降，其中組3的PK活性顯著低于組1和2（P<0.05），補充“天添”（組4）后，PK活性比組1，2，3顯著提高（P<0.05）。
表5 “天添”對羅非魚糖代謝的影響 n=3
組別 肝糖原
mg.g-1 肝己糖激酶(HK)
U.g-1.min-1 肝丙酮酸激酶(PK)
U.g-1.min-1
組1 29.75±1.66a 1.84±0.05a 6.24±0.12a
組2 29.58±0.44a 2.27±0.20a 5.87±0.14a
組3 30.89±1.28a 1.84±0.21a 4.82±0.13b
組4 31.85±0.84a 2.08±0.26a 10.41±0.27b
3 討論
3.1 對生產性能的影響
以增重率、特定生長率、餌料系數和蛋白效率為判定依據，飼料蛋白下降后，羅非魚的生產性能比較明顯的下降。補充“天添”（1g/kg）后，其增重率和特定生長率與降低蛋白組有明顯的優勢。
3.2 對形體指標的影響
飼料蛋白的降低導致魚體肥滿度的顯著下降，補充 “天添”后，可以顯著改善魚體的肥滿度。補充“天添”可降低羅非魚內臟指數，但對肝胰臟指數無影響。
3.3 對糖代謝的影響
補充“天添”后，各試驗組間肝糖原和己糖激酶（HK）活性沒有顯著差異；肝丙酮酸激酶活性因飼料蛋白的降低而快速下降，但補充“天添”后，又顯著上升。HK有包括GK在內的四種同工酶，在飼料碳水化合物含量對HK的調控方面，Furuichi和 Yone 認為魚類在服用葡萄糖后HK活性升高，但后來一些研究者指出不管是改變喂食節律或者飼料組成，HK的活性都不發生變化。林小植等用不同水平碳水化合物飼料喂食南方鲇 (Silurus meridionalis Chen) 幼魚后發現，其HK的活性隨時間變化不明顯；以及在對翹嘴紅鲌的研究中，戈賢平等發現在日糧等能量的條件下，飼料中的碳水化合物水平對HK沒有顯著影響，這些與Tranulis等、Panserat等在對虹鱒的研究結果是一致的。總體來說，與本試驗的結果一致，也表明，“天添”沒有通過提高或降低己糖激酶活性來發揮其功能。
有關丙酮酸激酶（PK）的研究表明，飼料中碳水化合物含量對魚類PK的活性具有一定的影響，如：Cowey發現虹鱒肝臟中PK活性隨著飼料中碳水化合物含量的增加有增加趨勢；蔡春芳報道，隨著飼料中碳化合物的增加，青魚肌肉和肝胰臟中PK活性顯著提高，與對照組相比，高碳水化合物組分別提高了28％和6％；Enes等在增加歐洲舌齒鱸日糧中淀粉含量時發現，其肝臟中PK活性也有增加趨勢，其中對照組和高淀粉組的活性為62.8和84.3 mU/mg 蛋白；在對翹嘴紅鲌的研究中，戈賢平等指出隨著飼料中碳水化合物添加量的增加，其PK活性也有增加趨勢，與無碳水化合物組比較，高碳水化合物組PK活性增加了307.14％。這與本試驗降低蛋白，增加糖類物質后，PK活性降低的結果不一致，但補充 “天添”后，PK活性又得到顯著的增強，似乎又證明的前述觀點，具體原因有待進一步研究證實。
4 小結
以生產性能、形體指標等為判定依據，飼料中補充“天添”有顯著的促長效果；以糖代謝酶活性指標判定，“天添”的添加增強了羅非魚對糖類物質的利用效率。
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發表于 2010-11-25 00:37:44
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