低聚木糖的檢測(cè)方法

xzxkwsn · 發(fā)表于 2010-6-9 15:20:08

江蘇康維生物有限公司
低聚木糖測(cè)定方法
（低聚木糖飼料添加劑行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)）
一、低聚木糖含量測(cè)定的主要設(shè)備和試劑
1、儀器設(shè)備
⑴儀器
刻度試管（25ml）
吸量管（5ml、1ml）
試管架
量筒
燒杯（1000、250、100、50ml）
棕色瓶（250ml）

⑵主要設(shè)備
7230型分光光度計(jì)及比色皿、滅菌鍋、電爐
2、試劑
⑴DNS配制
3，5-二硝基水楊酸                7.5g
NaOH                            14g
充分溶解于1000ml煮沸過(guò)的蒸餾水中，再加入：
酒石酸鉀鈉                      216g
苯酚                            5.5ml
偏重亞硫酸鈉                      6g
充分溶解后，于棕色瓶中4℃貯存5天后即可使用。

⑵2.0g/l標(biāo)準(zhǔn)木糖溶液配制
精確稱取0.200g木糖，溶解于少量蒸餾水中，于容量瓶中定容至100ml，于冰箱中4℃保存?zhèn)溆谩?br /> 二、木糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定

編號(hào) 1 2 3 4 5
2.0g/L木糖標(biāo)準(zhǔn)液(ml) 0.2 0.4 0.6 0.8 1
蒸餾水(ml) 0.8 0.6 0.4 0.2 0
DNS（ml） 3
A550 　　　　　

取五支25ml刻度試管，分別用1ml吸量管按上表吸入木糖標(biāo)準(zhǔn)液和蒸餾水，再用5ml吸量管吸入3mlDNS，沸水浴中煮沸5min，冷卻后定容至25ml，搖勻后，在7230分光光度計(jì)上于550nm處測(cè)定吸光度。
以上表各木糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度（0.4g/L，0.8g/L，1.2g/L，1.6g/L，2.0g/L）為縱坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的吸光度（A550）為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸出標(biāo)準(zhǔn)方程（C=MA+N）。
（注：方程中C為糖濃度，A為吸光度，M為直線斜率，N為截距）

三、低聚木糖含量的測(cè)定
取樣與預(yù)處理：① 從包裝袋的上、中和下部三處隨機(jī)各取產(chǎn)品干粉約10 g，充分拌合均勻得樣品粉A( 注意不得使粉塵飛揚(yáng)!)。
② 準(zhǔn)確稱取 M0 = 2.000 g ± 0.001樣品粉A，在40—50 ℃熱水浴中充分溶解( 30分鐘 )于100 mL蒸餾水中得樣品液B。
1、水份的測(cè)定
（1）先將2只空稱量瓶洗凈編號(hào)，置于烘箱在105℃條件下烘2小時(shí)后，轉(zhuǎn)入干燥器冷卻25分鐘，稱取空稱量瓶的絕干重量M1并記錄。
（2）稱取一定數(shù)量的樣品粉A至稱量瓶中，稱取稱量瓶的重量M2并記錄。然后，將稱量瓶置于烘箱在105℃條件下烘5小時(shí)，轉(zhuǎn)入干燥器冷卻25分鐘，稱取稱量瓶的重量M31并記錄。再將稱量瓶轉(zhuǎn)入烘箱烘1小時(shí)，重復(fù)上述操作稱取稱量瓶的重量M32并記錄，至（M32－M31）的值不超過(guò)0.002 g。
（3）水份的計(jì)算：
水份：a1（%）= [( M32－M1 )  / ( M2－M1)]× 100

注：M1—絕干稱量瓶重量
  M2—烘干前樣品重量和稱量瓶重量之和
   M32—烘干后樣品和稱量瓶的絕干重量之和

2、低聚木糖干基含量的測(cè)定
(1) 稀釋：搖勻后取樣品液B，在3000r/min條件下離心25分鐘得離心清液C。
(2) 低聚木糖的測(cè)定：分別以10mL移液管準(zhǔn)確移取10mL離心清液C（注意：要將移液管外壁擦拭干凈）置入50mL小三角瓶中，再以10mL移液管準(zhǔn)確移取10mL的8%H2SO4，搖勻后用牛皮紙和橡皮筋將小三角瓶的瓶口扎住（注意：不要扎得過(guò)緊，否則在降溫過(guò)程中容易造成試樣噴出）。水解、中和后，在50mL的量筒中以蒸餾水稀釋至50mL，DNS法測(cè)定稀釋中的木糖濃度C2(g/L)，則低聚木糖產(chǎn)品中低聚木糖含量為
a2（%）= C2×5×0.9×0.1/ M0 × 100
   干基含量 a3（%）=a2/(1－a1)

注：C2—稀釋液中的木糖濃度
  5—稀釋倍數(shù)
  0.9—酸水解后的轉(zhuǎn)換系數(shù)
0.1—樣品液B定容到100ml，即0.1升M0—稱取的樣品A的重量