蛋白測定問題

怕瓦落地 · 發(fā)表于 2009-11-20 16:44:23

應該是加堿不夠，堿加的是過量的??！我是這么認為的！

粗蛋白 · 發(fā)表于 2009-11-21 10:16:18

樣品的消化
首先，確定硫酸的用量，要根據(jù)樣品的用量來確定硫酸的用量，如果取2～3g樣，則需25mL硫酸；對于含鹽量高的樣品，如劣質魚粉、肉骨粉之類，須相應增加硫酸用量，因為NaCl+H2SO4→HCL↑，加熱后HCL會揮發(fā)。消化液中加入大量硫酸鉀或硫酸鈉，其目的是用于提高消化溫度。
K2SO4+H2SO4→KHSO4    KHSO4→K2SO4+SO3+H2O
如消化過程中，隨著硫酸的分解和水分的蒸發(fā)，硫酸鉀的濃度逐漸增大，則消化液沸點升高，加速了有機物的分解速度。但應注意硫酸鉀的用量不能過大，如果消化溫度太高，生成的硫酸銨也會分解出氨而使測定結果偏低。
（NH4）2SO4→NH3↑+(NH4)HSO4    （NH4）HSO4→NH3↑+S02↑+H2O
在消化液冷卻后呈固態(tài)，則表明硫酸鉀用量過大，或硫酸用量不足。事實上，增加試樣量和硫酸量，其混合催化劑的量不必增加。在試樣消化過程中，還要加硫酸銅等試劑為催化劑；進一步加速試樣的消化分解。硫酸銅的催化反應如下：
C+2CuSO4→Cu2SO4+SO2↑+CO2↑       Cu2+2H2SO4→2CuSO4+2H2O-t-S02↑
除硫酸銅外，常用的催化劑還有汞、氧化汞、硒粉、還原鐵或上述物質的混合物。對于一般谷物樣品，如玉米、小麥、稻谷等的消化，用硫酸銅作催化劑，只要適當增加鹽用量，使用強熱源，其效果與汞催化劑完全一樣；對于難消化物質的樣品，硫酸銅催化效果不如汞，測得蛋白質含量偏低。
用硫酸銅作催化劑的好處，是在蒸餾氨時可作為堿性反應的指示劑。
添加氧化劑可幫助有機質消化，但氧化性較強的氧化劑會使氨氧化為氮氣損失。對于富含脂肪或消化過程中易發(fā)泡的樣品，可在消化前添加少量氧化劑，如過氧化氫，一般不用高錳酸鉀和次氯酸作氧化劑。
有的飼料檢測書上有快速測定蛋白質的方法，如硒粉催化法、硒粉過氧化氫催化法、過氧化氫催化法等，按照這些方法測定的蛋白質含量常常偏低0.3％～1.0％，如無特殊情況，特別是測定的結果作為飼料配方的數(shù)據(jù)時，不要用快速測定法。
蒸餾
氨的蒸餾有兩種方法：常量蒸餾法和半微量蒸餾法。常量法將樣品分解消化后全部用于測定，取樣量大，測定結果的準確性和精確度都很高。半微量法測定結果精密度稍差一點。一般情況下建議使用半微量法，因為如果蒸餾失敗的話，半微量法還可繼續(xù)蒸餾，而常量法只好全部重來，費時費力。
半微量法中規(guī)定蒸餾4min，但未規(guī)定從何時計時。其實，蒸餾時間的長短要看蒸汽量的大小，蒸汽量小時須增加蒸餾時間。從經(jīng)驗來看，多蒸餾1～2min對結果沒有影響，并可隨時用試紙檢查是否蒸餾完全。所以，從何時計時的爭論也就無關緊要了。
蒸餾時要注意兩點，一是反應室里的溶液總體積要控制，也就是說，在沖洗加樣口時用水要少，否則反應室溶液體積太大，液面升高，容易噴進冷凝管內(nèi)。二是要控制蒸汽量或火力大小，蒸汽量太大也會將反應液噴進冷凝管中；火力太小，蒸餾速度慢，且易發(fā)生倒流；蒸汽產(chǎn)生要均勻，防止暴沸；一定要裝上蒸汽發(fā)生器的安全管，同時加上幾粒玻璃珠.