也求飼料淀粉糊化度的測定方法

lhwqq_71

也求飼料淀粉糊化度的測定方法，沒銀子了，請聯(lián)系[email=lhwqq_71@QQ]QQ[/email]：93318291.在線等

ljs3611

張麗英老師編的《飼料中分析及飼料質(zhì)量檢測技術(shù)》一書中有，不過我沒有電子版的，呵呵，沒法給你寫了，你可以去網(wǎng)上找找

sunmy888

熟化度的測定
1設(shè)備
天平，靈敏度0.001g；
恒溫水浴；
分光光度計(jì)。
2試劑
緩沖液：將3.7ml冰醋酸和4.1g無水乙酸鈉（或6.8gNaC2H3O2.3H2O）溶于100ml蒸餾水中，定容至1立升，必要時(shí)可滴加乙酸或乙酸鈉調(diào)整pH值至4.5±0.05.
酶溶液：將750ml脫支酶（amyloglucosidase,No.A-7255,濃度12100單位/g）溶于50ml蒸餾水。此溶液含粗制酶15mg（或180單位/ml）。測試當(dāng)天配制。
蛋白質(zhì)沉淀劑：1、ZnSO4.7H2O,10%（w/v）蒸餾水溶液；2、0.5N NaOH。
銅試劑：將40g無水Na2CO3溶于大致400ml蒸餾水中，加7.5g酒石酸，溶解后加4.5g CuSO4.5H2O。混合并稀釋至1立升。
磷鉬酸試劑：取70g鉬酸和10g鎢酸鈉，加入400ml10%NaOH和400ml蒸餾水。煮沸20-40min以驅(qū)趕NH3。冷卻，加蒸餾水至大約700ml，加250ml濃的正磷酸（85%H3PO4），用蒸餾水稀釋至1立升。
葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液：溶解100mg純葡萄糖于70ml蒸餾水中，稀釋至100ml。測試當(dāng)天配制。
3操作步驟
1.先將風(fēng)干樣品細(xì)磨碎使全部通過1mm篩。再根據(jù)樣品含淀粉程度不同，準(zhǔn)確稱取兩份樣品各100mg（純淀粉）、或各150mg（樣品淀粉含量60%以上）、或各200mg（樣品淀粉含量30-60%）、或各300mg（樣品淀粉含量15-30%）、或各400mg（樣品淀粉含量15%以下），分別置于25ml刻度試管內(nèi)。其中一份供制備“全糊化樣品”。用自來水冷卻試管，滴加適量蒸餾水使液面恢復(fù)到加熱前的位置。與“測定樣品”一起進(jìn)行以下步驟。
2.向“測定樣品”中加入15ml緩沖液。分別向“全糊化樣品”與“測定樣品”中加入1ml酶溶液。另取一空試管加入15ml緩沖液和1ml酶溶液，做為“空白”。在40℃水浴中保溫1h，起初搖動(dòng)一次，以后每15min搖動(dòng)一次。
3.保溫達(dá)1h時(shí)，加2ml 10% ZnSO4.7H2O，混勻，再加1ml 0.5N NaOH。用水稀釋至25ml，混勻，過濾（用Whatman#40濾紙）。
4.準(zhǔn)確吸取0.1ml濾液和2ml銅試劑，置于25ml刻度試管中。
5.將該試管置沸水浴中6min，保持沸騰，加2ml磷鉬酸試劑，繼續(xù)加熱2min。
6.用自來水令試管冷卻。加蒸餾水稀釋至25ml，堵住試管口（可用手套的拇指或手掌），反復(fù)顛倒試管使之混勻。
7.用分光光度計(jì)在420nm讀取吸收值。
8.測定樣品淀粉糊化（熟化）度的計(jì)算：
糊化（熟化）度（%）=（測定樣品光吸收-空白光吸收）/（全糊化樣品光吸收-空白光吸收）*100%
如要得知樣品的葡萄糖釋放量和淀粉含量，則需增加以下步驟：
9.建立葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線：吸取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液（1mg/ml）分別置于各有2ml銅試劑的試管中。按第4至第7步驟得出葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。當(dāng)樣品稱取量為200mg時(shí)，這些試管分別代表每克樣品含葡萄糖0、125、250、375、500、625、750mg的濃度。
10. 樣品葡萄糖釋放量和淀粉含量的計(jì)算：
樣品葡萄糖釋放量（mg/g）=(測定樣品葡萄糖值*-空白葡萄糖值*)*200/稱取樣品量（mg）
樣品淀粉含量（mg/g）=（全糊化樣品葡萄糖值*-空白葡萄糖值*）*0.9*200/稱取樣品量（mg）
（*根據(jù)光吸收從葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線查找）。

ljs3611

樓上是美國大豆協(xié)會(huì)熊博士根據(jù)美國化驗(yàn)方法簡化的一個(gè)簡易方法啊

sunmy888

4# ljs3611
我們實(shí)驗(yàn)室就是采用這個(gè)方法來做的。

ljs3611

是的，我們也用過，不過還是用哪種方法的時(shí)候多，呵呵 5# sunmy888

glory143

引用自ljs3611 發(fā)表于 2009-7-14 15:19的內(nèi)容
是的，我們也用過，不過還是用哪種方法的時(shí)候多，呵呵 5# sunmy888

脫支酶現(xiàn)在還有的買嗎???SIGMA不是已經(jīng)停產(chǎn)這個(gè)酶了嗎?

glory143

B淀粉酶各位都是哪里買的啊 ??好象質(zhì)量差異很大啊

水本無味

糊化度測得都不怎么準(zhǔn)確,怎么保證準(zhǔn)確啊

poplar

我正準(zhǔn)備用這個(gè)方法，請問，脫支酶在哪買呢？我還沒找到，我在上海，
在線等，謝謝了 ！