3種消毒藥對鏈球菌病的殺滅效果試驗

獸藥指南 · 發表于 2009-5-11 17:08:29

豬鏈球菌病是由多種溶血性鏈球菌引起的豬的一種多型性疫病，本病在我國各地都有發生，目前也成為規模化養豬場最常見的疾病之一。
   針對當前養殖業現狀，本文就消毒切斷傳染病傳播途徑方面，進行了3種消毒藥對鏈球菌殺滅效力的實驗，一方面是為了向廣大獸醫工作者推薦一種高效快捷的消毒藥，另一方面，希望能對鏈球菌病的防治工作起到一定的作用。
一、材料和方法
   （一）材料
   消毒藥碘酸、聚維酮碘、消毒威，其中碘酸、聚維酮碘為液體消毒劑，前者為深棕色液體、后者為紅棕色液體，主要成分為碘；消毒威為白色粉末、主要成分為二氯異氰酸鈉粉。
   菌株  豬鏈球菌C55138
   培養基 TSA-胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂，TSB-胰酪胨大豆酵母浸膏肉湯
   中和劑 1%吐溫-80磷酸鹽緩沖液（PBS）；1.5%吐溫-80磷酸鹽緩沖液（PBS）；3%吐溫-80磷酸鹽緩沖液（PBS）在800毫升蒸餾水中溶解8克NaCl、0.2克KCl、1.44克Na2HPO4,和0.24克Na2HPO4，用HCl調節溶液PH值至7.4加水定容至1升，在151bf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20分鐘，保存于室溫。
   （二）方法
   PBS配制方法：在800毫升蒸餾水中溶解8克NaCl、0.2克KCl、1.44克Na2HPO4和0.24克Na2HPO4，用HCl調節溶液PH值至7.4，加水定容至1升，在151bf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20分鐘，保存于室溫。
   中和劑篩選試驗  試驗菌為豬鏈球菌，參考常用消毒藥中和劑的選擇，用不同濃度的PBS作為中和劑，觀察其對3種消毒藥殺菌效果的中和作用。
   定性殺菌試驗  3種消毒劑對鏈球菌的殺滅效果試驗具體操作如下：
      將菌液進行細菌計數，然后加入0.03M磷酸鹽緩沖液稀釋，倍比稀釋9管，第10管不加消毒藥作為對照組；
   將中號試管10支排列于試管架上，寫好標簽；
   每管加無菌蒸餾水5毫升，放20℃水浴中；
   用蒸餾水對消毒劑進行遞進稀釋，倍比稀釋9管，第10管不加消毒藥作為對照。
   以每半分鐘加一管的速度加菌液5毫升于每管內，混合。
   加菌液后5、10、15、30、60分鐘時，每管各取0.5毫升加入4.5毫升液體培養基內。
   將接種細菌的培養基管置37℃培養24小時，如發生渾濁即表示有細菌生長。然后將其移植到固體培養基上，觀察菌落形態，或進行涂片染色鏡檢，以判斷生長的是否是實驗菌，以排除污染。若肉湯不渾濁，繼續培養7天，依然不渾濁方可判為無菌生長。
   有機物影響試驗  試驗菌株為鏈球菌菌株，有機物為小牛血清，設置不含小牛血清、含25%小牛血清以及含50%小牛血清組，做載體定量殺菌試驗。具體操作如下：
   將菌液進行細菌計數，然后加入0.03M磷酸鹽緩沖液稀釋，使試管菌液濃度含量為106~107個/毫升；
   吸取0.5毫升消毒劑溶液于4.5毫升測試濃度消毒劑溶液內；
   置20℃水浴中作用5分鐘；
   立即吸取上述菌液混合液1.0毫升，加入9.0毫升中和液混勻，中和10分鐘后進行細菌計數。
二、結果
   中和劑試驗結果  在對消毒威實驗中，用含2%吐溫-80磷酸鹽緩沖液（PBS）作為中和劑能完全中和所加消毒劑試驗濃度的殺菌作用；在對聚維酮碘的實驗中，用含2%吐溫-80磷酸鹽緩沖液（PBS）作為中和劑能完全中和所加消毒劑試驗濃度的殺菌作用；在對碘酸的實驗中，用含2%吐溫-80磷酸鹽緩沖液（PBS）作為中和劑能完全中和所加消毒劑試驗濃度的殺菌作用。
   定性試驗結果  定性分析試驗中，以50倍遞進稀釋消毒劑，做定性實驗。聚維酮碘、碘酸在50倍下未出現沉淀，故改變方案，在200倍下進行，得到如下結果：
表1聚維酮碘對鏈球菌的定性試驗
   消毒威實驗中，于第8管發現混濁，故其對鏈球菌的最低有效殺菌濃度（MIC）為1/6400；
   聚維酮碘實驗中，于第7管發生渾濁，故其對鏈球菌的最低有效殺菌濃度（MIC）為1/12800；
   碘酸實驗中，于第8管發生渾濁，故其對鏈球菌的最低有效殺菌濃度（MIC）為1/25600。
   有機物影響試驗見下表2：在不同的組別中加入相同的消毒液和菌株，分別在3、5、10、15分鐘以后觀察對細菌的殺滅效果，結果見下表：
表2有機物對聚維酮碘的殺滅效果影響
   備注：小牛血清對碘酸、消毒威的殺菌效果影響與上述實驗結果相似，故在此不另行列表。
   試驗結果表明，以上3種消毒藥對含25%、50%的小牛血清的鏈球菌作用5分鐘，殺滅率分別為99.94%、99.87%、而不加血清的鏈球菌殺滅率為99.98%。含50%的小牛血清對殺菌效果有輕度影響；含25%的小牛血清對殺菌效果無影響。
三、討論
   1.聚維酮碘、碘酸主要成分碘是活性很強的元素，有較強的滲透性能，可直接鹵化菌體蛋白質，產生沉淀，使微生物死亡，本品主要針對病毒、病菌的結構特征，使其蛋白質變性而滅活；消毒威主要成分氯遇水可產生次氯酸，而次氯酸不穩定分解釋放出活性氯和原態氧，呈現殺菌作用。
   2.消毒威、聚維酮碘、碘酸三種消毒劑分別在稀釋1/6400、1/12800、1/25600倍數下作用10分鐘，對鏈球菌的消毒效力與殺滅效力均已達到《技術規范》所規定的要求，從應用消毒的角度來看，經本次測試，這三種消毒藥對鏈球菌病有較好的防治效果。
   3.試驗證明，鏈球菌對本次試驗所用的消毒劑比較敏感，在稀釋倍數相當高的情況下，這三種消毒劑都對鏈球菌有良好的殺滅抑制作用，且安全穩定、作用時間長，受有機物、PH值影響較小，無腐蝕、無刺激性，對人和動物傷害低于一般水平，為穩定、高效的消毒劑。適用于常規以及撲疫期間的消毒，適當控制用量可以做到有效的殺滅病毒、病菌，同時又能節約成本。
   4.消毒的效果好壞很大程度上取決于消毒藥的好壞，而現在存于市面上的消毒藥良莠不齊，多數消毒藥對細菌、病毒的殺滅效果不理想，一定程度上造成了傳染病的流行暴發。