家禽疫苗與免疫程序

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有關家禽疫苗的種類和使用，生產上存在著不同程度的誤解和誤用。尤其是在免疫程序的制定上，不考慮本場的實際情況，盲目照抄照搬，造成了不應有的免疫失敗。本文為此做了
全面評述，將有助于提高認識和取得良好的禽病防制效果。

對各種家禽傳染病，如果能夠研制出安全有效的疫苗，似乎都應該收到消滅各種相應傳染病的效果，事實上則并非如此。這是因為各種家禽傳染病的病原特性和流行病學特征不同，致使其相應疫苗的防病效果遇異，這也是家禽免疫失敗的主要原因之一。
一、群體免疫應答

這是一個生物學過程，即使是最好的疫苗也不可能產生100％的保護，因為群體中每—個體的免疫應答水平不是相等的，而是傾向于成正態分布。一般來說，在接種疫苗后的免疫高峰期，群體中大多數家禽的免疫應答水平是可以抵抗強毒的攻擊，有一小部分家禽的應答水平不能抵抗強毒的攻擊，而另有一小部分家禽的應答水平很高。群體中免疫應答水平差的這一部分家禽所占的比例大小，取決于疫苗本身的免疫效力，免疫后時間的長短，群體本身的狀態等多種因素，而其重要性則視疫病的性質而異。對于高度傳染性的疫病如禽流感、新城疫、法氏囊、馬立克等，群體內即使存在少數未受保護的動物，只要有強毒引入就能在群體內造成傳播和流行。而對于螺旋體病一類不能很快傳播的疫病，有70％一80％的家禽得到保護就能有效阻止疫病在群體內的傳播。群體中這種免疫應答水平的不齊性，不僅給強毒在群體內的傳播以可趁之機，而且給后代母源抗體水平也帶來不齊性，并對后代主動免疫應答水平的不齊性起放大作用。
二、群體免疫失敗

很難給免疫失敗下一個嚴格的定義，簡單地說是指免疫后的群體未達到預期的免疫效果，仍發生相應的疫病流行。發生免疫失敗的原因很多，與疫病性質有關的主要有以下幾種：

(1)多血清型病原體，如大腸桿菌、沙門氏菌、傳染性支氣管炎等，如使用的疫苗與流行毒株的血清型不相符，則不能保護或僅能部分保護。

(2)病原體發生不同程度的變異，使原來使用的疫苗不能達到預期的免疫效力。如近年來出現的MDV超強毒株、IBDV變異株、NDV超強毒株，以及禽流感病毒常發生的抗原飄移(DⅢFT)飄變(5HIFT)等。

(3)疫苗對病因單一的烈性傳染病的控制起重要作用，可以降低發病率和死亡宰；疫苗對病因復雜的傳染病和某些能通過種蛋和胚胎傳播的疾病控制效果不理想。

(4)接種疫苗時群體存在免疫抑制性感染、營養不良或抑制正常免疫應答的各種應激。如IBDV、MDV、REV、LLV(淋巴細胞性白血病病毒)，CAA、球長、雛雞白痢等感染都對雞群產生嚴重史疫抑制。

(5)接種疫苗時群體處于感染潛伏期或在感染陰性期感染強毒(早期感染)。

(6)接種疫苗時群體母源抗體水平高，對主動免疫產生強干擾。
三、常規疫苗

常規疫苗是指通過常規的培養基培養細菌、禽胚胎接種、細胞培養繁殖病毒而制備的疫苗，常規疫苗包括弱毒活疫苗和滅活疫苗。

(一)活疫苗的概念及評價

1．弱毒活疫苗的概念

病原微生物毒力逐漸減弱或喪失，并保持良好的免疫原性，用這種活的、變異的病原微生物制成的疫苗稱為活疫苗（Live
Vaccines)，也可以稱為弱毒苗(sttenuated vaccines).

2．對弱毒活疫苗的評價

盡管目前在世界范圍內對活苗的評價有各種見解，但對話苗在控制和撲滅家禽疫病中的重大作用應當給予公正的評價和正面肯定。例如馬立克氏病疫苗不僅對控制危害嚴重的家禽馬立克氏病起了重要作用，而日．成為世界醫學和獸醫學領域第一個可以通過疫苗免疫而預防腫瘤性疾病的經典疫苗。


弱毒活苗的優點是：①免疫效果好；②免疫力堅強；①免疫期長；④可以用來對種禽免疫接種而使雛禽獲得被動免疫；⑤成本低廉。但弱毒活苗也存在以下的缺點：①存在散毒和造成新疫源問題，制備弱毒苗，希望它不散毒，但事實上難以作到，因為弱毒苗是活苗，在機體內可以短暫增殖并排出體外。如禽霍亂疫苗的某些品種對雞存在散毒問題。②殘余毒力問題：一般說來，弱毒苗殘余毒力較強者其保護力也強，但副作用也較明顯，如雞新城1系弱毒苗，對小雞可引起不良反應，有時大雞接種后排毒可使錐雞感染，個別的可能發生死亡。再如禽霍亂活苗對雞的產蛋影響較大。③某些弱毒活苗可引起接種家禽的免疫抑制，對其他抗原物質的應答能力減弱。如法氏囊的中等毒力疫苗，常對雛雞法，氏囊造成損傷而導致免疫抑制。④有疫苗污染的危險，尤其是病毒性活疫苗是由雞胚或動物細胞培養制成并連同培養物一起應用。因此存在著外源病原體污染的問題。如雞群中的白直病，有一部分可能來源于制作疫苗時，雞胚污染丁白血病病毒，雞群中霉形體污染在有些地方也可能與雞胚制苗的污染有關。⑤弱毒疫苗毒存在返祖的潛在危險：盡管一般情況下是不易發生的，因為弱毒株的遺傳性狀已經比較穩定，基因已發生了改變，面不是簡單的適應。新城疫LaSota株問世已近50年，在全世界廣泛應用，至今沒有返祖變異的跡象，但如果研制疫苗沒有經過嚴格的科學檢驗，遺傳性狀不穩定，必將造成嚴重的后果。

（二）滅活疫苗的概念及評價

1、滅活疫苗概念

選用免疫原性強的細菌、病毒等人工培養后，用物理或化學方法將其殺死(滅活)，使其失去活性，使傳染因子被破壞而保留免疫原性所制成的疫苗稱為滅活苗(Inaetivated Vaccines)，又稱為死苗(dead
vaccines；killed vaccines)。為增強疫苗的免疫效果，滅活疫苗中通常添加免疫佐劑，細菌性滅活疫苗保留的免疫原性物質主要為細胞壁，病毒性滅活疫苗保留的免疫原性物質主要為結構蛋白。

2．滅活疫苗的評價

滅活苗的優點是：①安全，不存在散毒和造成新疫源的危險；②不可能返祖返強；③便于貯存和運輸；④對母源抗體的干擾作用不敏感；⑤容易制成聯苗和多價苗。但滅活苗也存在一定的缺點：①不產生局部免疫；②引起細胞介導免疫的能力較弱；③用量大，成本高；④免疫途徑受限制，一般必須注射；③需要免疫佐劑來增強滅活苗的免疫效應。

3．滅活苗的發展及其與免疫佐劑的關系


滅活苗的發展與新的更有效免疫佐劑的發現和應用有著極為密切的關系。特別是近年來，由于油乳劑和蜂膠免疫佐劑的研制成功，使滅活苗的應用前景更為廣闊。如雞新城疫(ND)減蛋綜合癥（EDS一76)、傳染性支氣管炎(m)等用油苗和蜂膠苗免疫都產生了良好的免疫效果，不僅安全性好，而且保護率高、免疫期長。再如作者發明的禽霍亂蜂膠滅活疫苗與氫氧化鍆苗相比，將保護串由50％
60％提高到90％--96．5％，免疫期由3個月延長到6個月，產生堅強免疫力的時間由14天縮短到5—7天。總之，與目前國內外普遍應用的油乳劑苗相比，蜂膠疫苗系列產品具有以下特點：

(1)從公共衛生上看，蜂膠疫苗更安全，對人體無副作用，國家衛生部批準蜂膠作為食品新資源供人類食用。

(2)從免疫效果上看，蜂膠疫苗更快速、更高效、更持久；蜂膠疫苗免疫后5天即可產生堅強的免疫力；保護率高達90％一100％；免疫期長達6--12個月。

(3)從運輸保存上看，蜂膠疫苗更易于運轄和保存；-10~C不結冰，保存2年，2—8℃保存18個月，10-20℃保存12個月，20~30℃保存6個月。

(4)從使用上看，蜂膠疫苗更方便，蜂膠疫苗的流動性好，不會因為溫度的變化而造成注射困難。

(5)從免疫機制上看，蜂膠疫苗能調動機體整個免 疫系統，刺激機體細胞免疫、體液免疫、紅細胞免疫和補體系統都能產生免疫應答。

早期對疫苗佐劑的認識僅僅是提高抗體水平，因此，把與抗原棍合，能非特異地增強抗體應答的物質稱為疫苗佐劑。但是隨著對免疫學與抗感染過程的加深了解，有些病毒，細菌和原蟲感染，甲靠抗體的產生不足以消滅其傳染，需要調動機體的整個免疫系統的功能；既有體液免疫(HI），又需要淋巴細胞產生的細胞介導免疫(cMl)的參加，才能起到保護作用因此早期提出的提高m僅僅是佐劑的狹義定義，廣義的定義則是調動整個免疫系統的功能，即“凡能啡特異地通過物理的或化學的方式與抗原結合而增強其特異免疫性的物質稱為免疫佐劑。”其作用范圍包括調節體液免疫與細胞免疫的平衡，提早特異性抗體的產生，提高抗體滴度和延緩抗體在體內的分解、調節抗原引起的免疫反應類型，刺激各種細胞因子的產生等等。

免疫佐劑加強免疫反應，是一個非常復雜的過程，其作用機理至今尚未完全搞清。除可改變免疫反應類型，使體液免疫轉變為細胞免疫；改變免疫球蛋白的種類和亞類外，還可改變免疫反應狀態，使免疫耐受性變為免疫反應。因此，其作用機理，可能主要是改變正常免疫機能，既可吸引大量巨噬細胞以吞噬抗原，改變抗原的構型，使抗原物質降解并加強其免疫原性，又可將過多的抗原暫時貯存，延緩釋放，并發揮免疫系境的細胞間協同作用等。60多年前法國免疫學家Ramon曾講過，多種免疫佐劑研究的價值，不僅在于量終的實際應用，而且在此過程中揭示免疫系統的機理。

理想的免疫佐劑應符合以下主要要求(參見表1)。

(1)安全性好，無毒副作用。

(2)能使免疫原性弱的抗原產生滿意的免疫效果。

(3)不得引起中等強度以上的全身反應和嚴重的局部反應(化胺、壞死、腫脹)，可在局部貯留(硬結)，但必須逐漸被體內吸收。

(4)不應引起對佐劑本身的超敏反應，不應與自然發生的血清抗體結合而形成有害的免疫復合物。

(5)不得引起自身免疫性疾病。

(6)既不能有致癌性，也不得有致畸、致突變作用。

(7)免疫佐劑應為化學純，化學組成確定，可以定型生產。

(8)保存I一2年的佐劑疫苗，應該穩定有效。

(三)聯苗與多價苗的概念及優缺點。

不同種微生物或其代謝產物組成的疫苗稱為聯合疫苗或聯苗扣ombined vaCClile8)，同種微生物不同型或株所制成的疫苗稱為多價苗(Polyvalent vaccines)。

應用聯苗或多價苗，可以簡化免疫接種程序，減少人力、物力消耗，減少被免疫家禽應擻反應的次數，因而對養禽生產有利。所以很多國家都在大力研究和開發聯苗及多價苗。


聯苗和多價苗使用的原則是：不加重疫苗接種的副作用，不發生免疫原之間的相互干擾，可提高各個制品的免疫效果或者對其中的一種有增效作用。

四、生物技術疫苗的研究方向

對大多數家禽傳染病的防制來說，用常規方法制備的常規疫苗經長期應用證明是安全有效的，而且制備工藝簡單，價格低廉，因此，并非所有疫苗都需用基因工程苗來代替。然而也有一些病毒需要分子生物學技術開發新型疫苗．它們包括：

(1)不能或難以用常規法培養的病毒，如新城疫弱毒株在雞胚成纖維細胞上生長不良。

(2)常規疫苗效果差或反應大，如傳染性喉氣管炎疫苗。

(3)有潛在致痛性或免疫病理作用的病，如白血病、法氏囊病、馬立克氏病。

(4)能夠降低成本，簡化免疫程序的多價疫苗，如傳染性支氣管炎血清型多而且各型之間交叉保護性差，也可以將幾個疾病的病毒抗原在同‘載體上表面而生產出一次接種預防多種疾病的多價苗。

基因工程的另一個優點是具有把保護性抗原基因插入載體的能力，修飾的載體能表達來自病原微生物的保護性抗原基因，細菌和病毒載體，都能產生兼有活疫苗和滅活苗優點的疫苗，這種類型的疫苗具有亞單位苗的安全性又具有活疫苗的效力。此外，它們易于大規模使用(噴霧或氣霧)。生產載體疫苗的費用與生產活疫苗的費用相同，目前世界上幾個研究組織正在生產特定的禽用疫苗載體。

表1
家禽活苗與油苗及蜂膠苗特點比較

活苗(弱毒苗)	油苗(滅活苗)	蜂膠苗(滅活苗)
1 ．二次或多次免疫	一次或二次免疫	一次或二次免疫
2．抗原用量少，接種后能增殖	抗原用量多，接種后不增殖	抗原用量多，接種后不增殖
3．有的免疫期長，有的短	免疫期長，效果可靠	生產免疫力快，免疫期長，效果可靠
4．多種免疫途徑	只能注射	只能注射
5.不需佐劑，	油乳劑能增強免疫力	蜂膠能增強免疫力
6。容易激發體液及細胞免疫，對病毒及細胞內寄生菌效果更好	主要激發體液免疫	能激發體液免疫，紅細胞免疫及補體系統
7．對母源抗體的中和作用敏感	對母源抗體的中和作用不敏感	對母源抗體的中和作用不敏感
8．有散毒造成新疫源的可能	不排毒，無污染危險	不排毒，無污染危險
9．可能污染傳染因子或其他不利因子	滅活過程中可將傳染因子及其他不利因子破壞	滅活過程中可將傳染因子及其他不利因子破壞
1 0．有返祖返強的危險	無返祖返強的危險	無返祖返強的危險
11.疫苗合用（聯苗）較困難	容易制成聯苗或多價苗	容易制成聯苗或多價苗
12．能形成組織反應如肉芽腫無過敏癥危險。	無組織反應，但可能有毒性，可產生副作用。	無組織反應，無毒副作用
1 3．有殘余毒力	無殘余毒力	無殘余毒力
1 4．運輸、保存要求條件較高	運輸、保存方便。	運輸、保存方便，可低溫保存
1 5．通常制成凍干苗以利保存	均為濕苗	均為濕苗

基因工程疫苗應鎮比目首應用的常規疫苗具備更多優點，為了被人們接受，它們必須具備安全性、生產工藝、免疫艘力、免疫期、免疫途徑、生產成本等方面的優點，并被有關管理部門和公眾接受。

1．基因工程亞單位苗

這是將編碼某種特定蛋白質的基因組，經與適當履粒或病毒載體重組后導入受體細菌、酵母或動物細胞，使其在受體中高效表達，提取所表達的特定多肽，加免疫佐劑即制成亞單位苗。新的基因工程亞單位苗的設計策略是：①利用真核細胞高效表達；②產物能分泌和糖基化；③使之能聚合成帶有多價保護性抗原決定簇的顆粒性抗原。

2．基固工程活載體苗

這是將外源目的基因用重組DNA技術克隆到活的載體病毒中制備的一種疫苗．可直接用這種疫苗經多種途徑免疫家禽，而亞單位苗則用表達產物經提純后免疫家禽。病毒活載體苗其本質是雜交病毒，它既含有一種病毒復制所需的全部基因．又含有另一種病毒編碼免疫原性蛋白質的基因片段。用這種雜交病毒免疫家禽既能刺激宿主產生體液免疫．又能刺激宿主
產生細胞免疫。

3．合成肽苗

這是利用重組DNA技術根據病毒基因的核苷酸序列，可推導出病毒蛋白質的氨基酸序列，從面可用人工合成方法制備病毒主要抗原相應的多肽，制備合成肽苗，從免疫識別和免疫調節的角度設計疫苗，探討和試制人工部分改變的肽．是目前研究的課題．從對蓑體和佐劑的角度開發是合成肽苗應用研究的重要課題，從防病的角度開發．多肽苗應向合成肽多價苗發展，從生產的角度開發，多肽苗應向改善畜禽品質和提高生產性能方向震展。

4．佐劑和非載體使用系統

免疫佐劑用于提高抗原的免疫原性，對于亞單苗和一些滅活苗是必霄的，免疫佐劑的選擇對于疫苗的成功是關鍵，遺憾的是大多數在實驗室工作良好的免疫佐劑．不適合于免疫接種(例如弗氏完全佐劑)，關于免疫佐劑的研究，目出在免疫學和生物化學方面都是非常活躍的熱點和焦點，這些包括佐劑的緩釋機制，免疫刺激復合物和免疫刺激復合物樣佐劑。

5．核酸疫苗

這是指將含有編碼某種抗原蛋白基因序利的質粒載體作為疫苗，直接導人家禽細胞內，從而通過宿主細胞的轉錄系統合成抗原蛋白，誘導宿主產生對該抗原蛋白的免疫應答，達到免疫的目的。核酸疫苗又稱為基因疫苗或衣果DNA疫苗，這種免疫稱為核酸免疫、基因免疫、DNA介導的免疫以及遺傳免疫等。這種疫苗可誘導輔助性T細胞、體液免疫以及細胞毒性T細胞應答。

最近，用核酸疫苗接種家禽預防新城疫已獲成功，為家禽疫苗的研制又提供了一種全新的途徑。這類疫苗較前述疫苗有如下優點：①不需使用復制型載體或活的生物體即可產生CTL應答；②通過宿主細胞原位表達基因必將導致蛋白質的合成，這種蛋白質較之在原核生物表達系統中產生了那些蛋白更精密地象天然分子，故能誘發更有效的免疫應答；③核酸疫苗是單一劑量即可激發長時間的免疫；④核酸疫苗的生產成本低，因為它不需要大規模生產蛋白質抗原；⑤質粒DNA疫苗可制成干燥的小粒，便于貯藏和運輸、干燥的DNA小粒在室溫不相對穩定，不需要冷藏設備。
五、確定免疫程序

目前，傳染性疾病仍是我國養禽業的主要威脅，而免疫接種仍是預防傳染病的有效手段。疫苗的發展和應用帶來的經濟效益和社會效益是其他任何保健制品無法比擬的，特別是隨著規模化、集約化、產業化養禽業的興起，家禽疫苗的應用前景十分廣闊，確定免疫程序的依據是正確應用疫苗的關鍵。


在什么時期接種什么樣的疫苗，是養禽者尤其是大型養禽場最為關注的問題。沒有一個免疫程序是通用的，而生搬硬套別人現成的程序也不一定能獲得最佳的免疫效果。最好的辦法是根據本場的實際情況，參考別人成功的經驗，結合免疫學的基本理論和疫苗的特點，著重考慮下列的一些因素，作為確定適合本地或本場免疫程序的依據。

(1)本地區的禽病疫情。

(2)本場的禽病史及目前仍有威脅的主要傳染病，每一養禽場都有自己特殊的發病史，就好比病人的病歷一樣，制定免疫程序時必須考慮養禽場已發過什么病，發病日齡、發病頻率和發病批次。依此確定疫苗的種類和免疫時機，對本地、本場尚未證實發生的疾病，必須證明確實已受到嚴重威脅時才能計劃接種，對強毒型的疫苗更應非常慎重，非不得已不引進使用。

(3)飼養本場種苗的外地各處的禽病疫情。

(4)所養家禽的用途及飼養期、種雞、商品雞、肉仔雞的疫苗則各不相同。

(5)母源抗體的影響，這在選擇馬立克氏病，雞新城疫和傳染性囊病疫苗(血清型或毒株)時應認真考慮。

(6)不同種類的家禽以及同一種類內的不同品種對某些疾病抗病力的差異。

(7)疫苗接種日齡與家禽易感性的關系：如馬立克氏病的免疫必須在出殼24小時內完成，因為雛雞1—3日齡對MD的易感性最高，并隨著日齡增長，對MD易感性降低，傳染性喉氣管炎，成年雞最易感，并發病典型，所以該病的免疫應在7周齡以后免疫才可獲得好的效果。

(8)考慮免疫途徑。不同疫苗或同一疫苗使用不同的免疫途徑，可以獲得截然不同的免疫效果。如新城疫滴鼻點眼明顯優于飲水免疫。還有些疫苗病毒親嗜部位不同，也應采取特定的免疫程序。如IBD和AE親嗜腸道，即病毒易在腸道內大量繁殖，所以最佳的免疫途徑是飲水和滴口免疫，雞痘親嗜表皮細胞，必須采用刺種免疫。

(9)考慮疫病發生與季節的關系。有許多傳染病受氣候因素影響很大，具有明顯的季節性，尤其季節交替，氣候變化較大時常發、禽霍亂、大腸桿菌、腎型傳支、慢性呼吸道病等。免疫程序必須隨著季節有所變化。

(10)不同疫苗之間的干擾和接種時間的科學按排。

(11)所用疫苗毒(菌)株的血清型、亞型或株的選擇。
‘

(12)疫苗劑型的選擇，例如活苗或滅活苗、濕苗或凍干苗等。

(13)疫苗生產廠家的選擇、國產、進口。

(14)疫苗劑量和稀釋量的確定。

(15)某些疫苗和聯合使用或使聯苗與多價苗。

(16)同一種疫苗根據毒力先弱后強的按排(如IB疫苗先H120后H52、IBD疫苗先弱毒中等毒力，ND疫苗先Ⅳ系后I系)。

(17)對難以控制的傳染病，應考慮滅活苗和活苗同時用，同時了解活苗和死苗優缺點及相互關系，合理搭配使用，如新城疫、腎型傳支、變異傳支等。

(18)根據免疫監測結果及突發疾病的發生所作的必要修改和補充等。

在基因工程疫苗投入實際應用之前，用常規方法制備的疫苗仍然是預防禽病的有力武器。在今后的九年中，仍將占據主導地位。對一個既定的疫病有必要投人更多的精力確定生產疫苗的最佳途徑和方法，基因工程和免疫佐劑將在疫苗技術中起著越來越重要的作用，常規疫苗中的聯苗與多價苗，及基因工程疫苗是今后家禽疫苗發展的重要方向，其使用范圍將會日益廣闊，全世界或各個地區流行的主要傳染病，隨不同歷史階段也會有所改變，從而新疫苗的品種在不斷研制，確定免疫程序的依據也在不斷更新。

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資料比較詳實，對企業很有用處，還的疫苗、還的免疫體系還需要關注影響因素才能保證免疫效果。

徐運杰2008

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