精液品質檢查

大器晚成

目前在全世界范圍內，牛的人工授精已普遍采用冷凍精液輸精。因此，在奶
牛人工授精中的精液品質檢查，主要是指在輸精前后，對解凍后的精液進行檢查。
國內外公牛的冷凍精液都有嚴格的質量標準，用戶對其質量的檢查主要是進一步核
實其質量，了解或發現操作中的問題。

一、
精子解凍活率檢查

（一）顆粒冷凍精液
取消毒并封裝于安瓿內的稀釋液（一般為2．9％檸檬酸
鈉1毫升），放于40℃的溫水中，待其溫度接近40℃時，打開安瓿放入顆粒冷凍精液1粒，輕輕搖動，使其融化，即可取樣在高倍顯微鏡下觀察其活率。
檢查時顯微載物臺的溫度應保持在37℃左右。在評定活率時，要注意上、中、下三個層次精
子活率的變化，左、右、上、下四個方位視野的差異，才能做出較準確的判斷。活
率在0．3以上即為合格精液。

（二）細管冷凍精液
可直接投入40℃溫水中，待其融化后，立即取出，剪去棉塞一端，取樣檢查。

二、
死活精子比例檢查
先將精子死活染色液分裝于容量為0．5毫升左右的指形玻璃小管中，染色液
為伊紅。苯胺黑溶液（含5％水溶性伊紅和1％苯胺黑溶液），染色前先放入37℃恒
溫箱或水浴箱中預熱，滴入解凍精液2～3滴，混勻后再放入溫箱，3 分鐘后即可制做抹片，待抹片風干革命后在油鏡下觀察。死精子為紅色，活精子不
著色或只在頭部的核環處呈淡紅色。隨機觀察200個精子并計算出死、活精子的比例。
用這種方法所得到的活精子百分數要高于精子的活率。對于活率觀察，技術熟練、估計準確的人
員可不做精子死活染色的檢查。

三、
密度檢查
對精子密度檢查的最簡單方法是，取1滴解凍精液在低倍顯微鏡下憑經驗粗略
地估計其密度是否符合輸精的要求。
較精確的方法是采用血球計數裝置，進行精確的計算，具體方法在這里不作
介紹。以此為基礎建立起來的光電比色法測定精液中精子密度，已經被大型公牛站廣泛應用。
通過密度的檢查可以計算出被檢精液每毫升所含的精子數，再根據解凍后的
活率可得每毫升精液中的有效精子數（即呈直線前進運動的精子數），最后乘以輸精劑量（顆粒冷凍精液為0．1±0．01毫升；細管冷凍精液為0．5毫升或0．25毫升）
計算出每個輸精劑量的有效精子數（顆粒冷凍精液為1200萬以上；細管冷凍精液為 1000萬以上）。

四、
其他方面的檢查
包括畸形精子的比例、頂體完整率、生存指數等方面的檢查。在一般生產條件下是不進行的，只有在輸精后母牛的受胎率明顯下降又很難找到確切的原因時，才送交有關實驗室進行這些項目的檢查。
第三節
奶牛精液的冷凍保存
到目前為止，在各種家畜中，牛的精液冷凍保存技術最為成功，已形成一套完整定型的工藝流程。
（一）、
冷凍稀釋液的選擇和配制

（1）稀釋液的選擇牛冷凍精液稀釋液的種類較多，
可根據自身的經驗和條
件選用并固定1～2個最適宜的稀釋液配方。

（2）稀釋液的配制原則
第一，配制稀釋液所使用的一切用具，必須經認真清洗和嚴格消毒。
第二，稀釋液要現用現配，保持新鮮，經密封、消毒的稀釋液，允許在0～5℃
的冰箱中保存1周。但卵黃、抗生素、酶、激素等有生物活性的物質，
必須在用前
臨時添加。
第三，稀釋用水應為蒸餾水或重蒸餾水，要求保持新鮮、中性。
第四，配制稀釋液所用的化學制劑要純凈，一般要求化學純或分析純；稱量
要準確無誤，經充分溶解、過濾后進行消毒（隔水煮沸或蒸氣消毒）。
第五、卵黃和奶類成分要求新鮮、無污染、無雜質。
第六，抗生素等有生物活性的物質，必須在稀釋液冷卻至室溫時加入，以免
失去活性。
（二）、精液的稀釋

（1）稀釋倍數的確定對原精液的稀釋倍數主要依據精液的精子密度和活率，
以及精子解凍后的活率來確定，雖無具體規定，但必須保證每個輸精劑量中，在解
凍后所含的有效精子（直線前進運動的精子）數達到規定的標準。例如，60年代，
國外冷凍精液的稀釋倍數只有一個大致的范圍，英國不超過50倍，愛爾蘭10倍左右，
法國9～23倍，前蘇聯10～25倍，美國為30～50倍，保證每個輸精劑量有1500 萬有
效精子。
我國當前在顆粒冷凍精液的生產中，由于顆粒體積的縮小和解凍后的再稀釋，
一般按原精液做1：2～4倍稀釋。滴凍顆粒為0．1毫升，解凍時每毫升的解凍液加
入一粒，即為一個輸精劑量。其中含有效精子不少于1000萬，仍可獲得理想的受胎
效果。實際上，其最終稀釋倍數是30倍左右。

(2）稀釋方法
甘油是牛精液冷凍保存的重要保護劑，但它對精子同時也具有性。為減低甘油對精
子的有害作用，多采用兩次稀釋，即采精后先用不含甘油的
第一液稀釋到最終稀釋倍數的一半，經緩慢降溫（不少于60分鐘）至4～5℃的溫度
下，再加入同溫等量含甘油的第二液。第二液的加入方法有一次或多次加入，以及
緩慢滴入等方法。甘油的最終濃度通常為7％。
近年來，在試驗的基礎上，我國有的采用一次稀釋的方法。即采精后用同溫
的含甘油稀釋液一次稀釋完成，也取得了良好的冷凍保存效果。

（三）、精液的低溫平衡
平衡是指精液加入含甘油的稀釋液后，需在4～5℃的條件下放置的時間。在
此之前，首先要把采精后稀釋的精液緩慢降溫至4～5℃。具體做法是：將裝精液的
容器外面包以紗布、棉花，或放入同溫的水中，再放入0～5℃的冰箱中，經1 小時即可達到降溫的目的。
牛精液在冷凍前各國采用的平衡時間差異較大，我國一般在2～4小時。

（四）、精液分裝和凍結

（1）分裝牛精液在冷凍前可采用玻璃安瓿、塑料細管和顆粒3種分裝方法。
目前應用較多的是后面兩種，并且細管法日漸增多。顆粒法雖有容積小、操作簡單、
成本低、快速凍結效果好等優點，但存在著不易標記、易破損和污染以及解凍再稀
釋等問題。
細管法具有衛生條件好、容積小、可快速冷凍、精子損耗少，、易標記和適
于機械化生產等優點。到目前為止，我國仍多采用顆粒法冷凍，但已逐步向細管法
過渡。
精液分裝前，塑料細管要用打印機作好有關標記（公牛號、品種、生產日期
等），并在紫外線燈下照射消毒。
分裝是用專門的機械進行的，分裝后即可放入0～5℃的。冰箱緩慢降溫和平
衡，時間與顆粒法相似。
凍結時，將平衡后的細管平放在紗網上，放置在距離液氮面2～3厘米處，停
留7～8分鐘，隨后浸入液氮。經抽樣檢查合格后，即可按一定包裝規格包裝并在液
氮中長期保存。

（2）凍結
牛精液冷凍的冷源普遍應用液氮。顆粒精液在經液氮冷卻的氟板（聚四氟乙烯）、銅紗網、鋁板上滴凍。要使承
接精液的表面與液氮面保持一定的距離（1～2厘米）。在滴凍的過程中，要維持一 80～一120℃的溫度。滴凍前要將經平衡的精液充分混勻。并檢查精子的活率。
滴要迅速，顆粒要均勻，每毫升經過稀釋的精液滴10粒左右為宜。滴凍結束后，要
停留2～3分鐘，待所有顆粒已凍結立即投入液氮。經抽樣檢查（一般隨機抽取2粒）
，解凍活率在0．3以上者，即可裝于紗布袋中，經標記后在液氮中保存。每滴凍完
一頭公牛的精液后，必須更換氟板等用具。
目前，細管的容量分0．25毫升和0．5毫升兩種，由無毒塑料（聚氯乞烯）制
成。管的一端填有棉塞和聚乙烯粉未，粉未遇水即固化自動封口，輸精時又成為推
送精液的活塞；另一端在注入精液后，可以聚乙烯粉或鋼珠（或塑料珠）封口，要
注意在封口處與精液間留有10～13毫米的空間，防止冷凍過程中咽膨脹引起細管爆裂。

二、精液貯存和解凍

（一）精液的貯存
牛的冷凍精液是以液氮做冷源進行貯存的，需要時可隨
時取出。為防止溫度變化對精液品質的影響，取放動作要迅速，盡量減少在空氣中
停留的時間。從貯存容器中提取冷凍精液時，精液不應超過液氮容器的頸基部，避
免因溫度的回升造成精液解凍活率的下降。
牛的冷凍精液已有40多年的歷史。試驗證明，保存至今的冷凍精液仍具有授精
能力。但一般認為牛的冷凍精液隨保存時間的延長，精子的活力和授精能力逐漸降
低。牛冷凍精液長期保存的確切時限，尚需繼續研究和觀察。

（二）解凍
冷凍精液的解凍過程會影響精子的活力，要注意解凍的溫度和操作方法。
最初世界各國對解凍溫度的要求不同，大體可分為高溫40℃、室溫15～20℃和
冷水10℃3種。當前認為40℃左右解凍效果最好。隨著解凍溫度的降低，
精子活率
有逐漸降低的趨勢。
解凍方法：顆粒精液解凍多采用一定量的經預熱至40℃的解凍液，將顆粒精液
投入其中，經搖動至融化。解凍液可用2．9％的檸檬酸鈉溶液，也可用含葡萄糖3 ％和檸檬酸鈉1．4％的溶液。制成的解凍液，分裝于安瓿內，經滅菌和封口后可長
期使用。
細管精液的解凍應將封口端向上，棉塞端朝下，投入40℃左右的溫水中，待細
管顏色一變立即取出用于輸精。解凍后的精液應立即取樣檢查活率，凡在0．3以上
者即可使用。若一次輸精母牛頭數較多，也可在輸精前隨機抽樣檢查。
解凍后的精液其精子存活時間較短，幾乎均采用距輸精數分鐘至１小時之內解
凍，才能保證較高的受胎率。
為了方便起見，國內外一些人工授精員在到現場輸精前將細管冷凍精液裝入貼
身的衣袋內、用體溫使其解凍后進行輸精，這是一種簡便而有效的方法。

三.奶牛的輸精。

一、輸精時間的確定
奶牛的發情周期平均為21天左右，發情持續期較短，大約２0小時，排卵一
般發生在發情結束后10～16小時，因此，準確的發情鑒定，適時輸精是提高受胎率
的有力保證。
奶牛輸精的實踐表明：在母牛接受爬跨（即站立發情階段的末期或浚情后期
的開始階段）；卵泡發育期的后期或卵泡成熟期輸精坷獲得最佳的受胎效果。
從母牛接受爬跨開始到排卵后的這段時間輸精的不返情率表明；在母牛接受
爬跨第八至二十四小時輸精的受胎率最高。
輸精人員應掌握以下規律：母牛在早晨接受爬跨，應在當日下午輸精，若次
日早晨仍接受爬跨應再輸精1次；母牛下午或傍晚接受爬跨，可推遲到次日早晨輸精。
如果輸精員由本場人員擔任，一般在第一次輸精后12小時做第二次輸精。如
果是個體飼養的小群奶牛，輸精時間應更靈活些。

二、輸精部位和輸精次數

（一）輸精部位
大量的試驗證明，采用子宮頸深部、子宮體、排卵側或排
卵側子宮角輸精的受胎率沒有顯著差異。當前普遍采用子宮頸深部（子宮頸內口）
輸精。

（二）輸精次數
冷凍精液輸精，除母牛本身的原因外，母牛的受胎率主要
受精液質量和發情鑒定準確性的影響。若精液質量優良，發情鑒定準確，1 次輸精可獲得滿意的受胎率。由于發情排卵的時間個體差異較大，一般掌握在1～2次為
宜。盲目地增加輸精次數，不但不能提高受胎率，有時還可能造成某些感染，發生
子宮或生殖道疾病。

三、輸精方法
輸精方法有開張器輸精和直腸把握輸精兩種。

（一）開張器輸精法
借助開張器將母牛的陰道擴大，借助一定的光源（手筒、額鏡、額燈等）找到子宮頸
外口，把輸精管插入子宮頸1～2厘米處，注入精
液，隨后取出輸精管和開張器。此法雖然簡單、容易掌握，但輸精部位淺，易感染，
受胎率低。因此，目前很少采用。
（二）直腸把握子宮頸輸精法與直腸檢查相似，一只手戴上薄膜手套，伸入
直腸，掏出宿糞，尋找子宮頸，并握住子宮頸的外口端，使子宮頸外口與小指形成
的環口持平（圖3一4）。用伸入直腸的手臂壓開陰門裂，另一只手持輸精器插入陰
門（插入時先斜上再轉成水平，切勿將輸精器插入尿道開口）。借助握子宮頸外口
處的手與持輸精器的手協同配合，使輸精器緩緩越過于宮頸內側的皺褶（一般為42 個），然后注入精液，在把握子宮頸時，位置要適當，才有利于兩手的配合，既不可靠前，也不可太靠后，否則難以將輸精器插入子宮頸深部。
直腸把握子宮頸法是國內外普遍采用的輸精方法，具有用具簡單，
不易感染，輸精部位深和受胎率高的優點。其受胎率比開張器法高出10%—20%，大幅度提高了
奶牛的繁殖率和經濟效益。同時借助直腸觸摸母牛子宮和卵巢的變化，也可進一步
判斷發情或妊娠情況，防止誤配或造成流產。
個人的授精技術對受胎率有很大影響，有經驗的人工授精員可獲得最佳的受胎
效果。在炎熱的氣候條件下，母牛的發情時間較短，全天進行輸精都有效。在這種
條件下，奶牛飼養者自己進行人工授精操作往往可獲得較好的結果，而受過一定人
工授精技術訓練是獲得最佳效果的保證。經常對人工授精人員進行考核有助于評價
和改進他們的輸精質量和受胎效果。為了獲得良好的受胎效果，精液應貯存于可定期檢查的容器內。

四、產犢到第一次輸精最佳間隔的確定
雖然產犢后首次輸精時間提早可使母牛妊娠的時間提前，
但產犢后過早配種也
并非明智之舉，因為：①產后泌乳早期需要一段時間恢復身體；②一產青年母牛在
下次妊娠前尚未完成自身的發育；③產后早期妊娠率很低；④實踐證明奶牛的
產犢間隔少于365天并非有利；⑤更重要原因是產后過早配種其泌乳期達不到305天。
因此，許多生產者對一些高產牛都把產后第一次配種時間控制在產后85～95天。
五、母牛的再配種
很難做到所有的輸精都能成功地妊娠，有時經多次輸精仍不妊娠；有些雖然能
正常妊娠，但有時會在妊娠后發生胚胎死亡和流產。通常把在妊娠初期她天內的妊
娠失敗稱胚胎死亡；妊娠43～151天的妊娠中斷稱胎兒死亡；而把在此以后發生的
妊娠中斷叫流產。胚胎死亡可能無任何明顯外部癥狀，因此，母牛輸精后繼續進行
發情觀察是十分重要的。特別是對輸精3周后無發情表現而被認為妊娠的母牛更應
注意。對輸精3～6周的母牛也應繼續觀察，發現返情，應及時再輸精，以避免時間
和經濟的浪費。最后一次輸精經6～8周若無任何發情表現，應該進行妊娠診斷。如
果經多次輸精仍不妊娠，就應及時淘汰。若牛群中有多頭母牛出現類似問題，應及時檢查和處理。實踐證明，上述問題常常是管理不善所致。

2008東北人

太專業了................