應用自家組織苗的風險評價和制苗方法的創新（轉）

登高遠眺

      藍耳病和圓環病毒, 是當前養豬場普遍存在, 并且最難以對付的兩種疾病. 由于當前國內市場上還沒有針對這兩種疾病的免疫效果確切的疫苗供應, 因此, 自家組織苗作為預防這兩種疾病的一種無奈選擇, 正在全國各地大小豬場被廣泛使用.
      2002年, 自家組織苗最初開始在豬場推廣使用時, 的確取得了顯著的效果, 對豬場有效地預防藍耳病和圓環病毒, 發揮了巨大的作用, 很多瀕臨倒閉的豬場因此而起死回生. 但問題是: 很多人過分地夸大了自家組織苗的作用, 有的豬場場長和技術人員, 對自家組織苗甚至到了迷信的程度. 曾經有一個豬場場長介紹他的養豬經驗, 說他平時其他工作基本都不用管, 只要監督制作好自家組織苗就可以了, 以致他們豬場的病豬根本看不到肺臟病毒性病變, 仍然堅持采集病豬的肺臟制作自家組織苗.
      目前, 很多養豬技術人員對自家組織苗的認識, 最起碼存在下列兩大誤區:
      (1)自家組織苗可以長期使用. 自家組織苗的效果, 取決于病變組織中病毒的含量. 2002年, 當自家組織苗剛開始推廣使用時, 由于之前豬場一直沒有使用過有效的疫苗, 發病豬癥狀都比較典型, 病變組織中病毒含量較多, 而且每批采集的病料中病毒含量的變異度也不大, 所以, 自家組織苗的效果顯著而且穩定. 但是, 隨著疾病逐漸得到控制, 典型的病料越來越難以獲得, 通過采集自然發病豬的病變組織制作自家組織苗, 效果將越來越差, 這是使用自家組織苗的必然規律. 事實已經證明: 很多豬場在使用自家組織苗一段時間后, 效果確實越來越差, 不但藍耳病或圓環病毒依然存在, 而且其他疾病也越來越難以控制. 所以, 自家組織苗只能是臨時應急的一種措施, 不能長期使用. 長期使用自家組織苗, 將給豬場帶來一系列風險, 具體我們將在本文風險評價部分討論.
      (2)自家組織苗包醫百病. 很多技術人員都認為: 只要是豬場存在的疾病, 自家組織苗中都會含有相應的抗原, 所以, 使用本場發病豬病變組織制作的自家組織苗, 可以預防豬場存在的所有疾病. 這種認識是非常錯誤的. 作為一種疫苗, 要使其對特定的傳染性疾病產生免疫作用, 必須具備兩個條件: 1)疫苗中必須含有相應的具有免疫源性的抗原; (2)抗原的劑量必須符合一定的要求. 抗原量太少, 無法有效產生抗體; 此外, 抗原量太多或太少, 還有可能誘導免疫耐受. 自家組織苗通常都是通過采集病豬的病料來制作的, 然而, 各種病原對組織的嗜好是不一樣的, 藍耳病毒在肺部含量較多, 而豬瘟病毒因其嗜內皮細胞的特性, 使其在腎臟和免疫器官含量較多. 如果把病豬所有內臟一起搗碎制苗, 各種抗原都將被稀釋, 很難達到有效免疫的抗原量. 所以, 我們制作自家組織苗, 都是有針對性的, 疫苗用于預防什么疾病, 就應該選擇什么病原含量最多的器官或組織制苗.
      因此, 自家組織苗不是包醫百病的靈丹妙藥, 不但不能長期使用, 也不能濫用. 在應用自家組織苗以前, 一定要認真進行風險評價, 在權衡利弊的基礎上, 再進行科學決策.
      1 風險評價 應用自家組織苗的風險, 主要來自下列兩個方面:
      1.1 免疫效果不確切的風險. 由于我們無法準確地定量分析病料組織中抗原的含量, 同時, 自然發病的豬, 每頭的病變組織中病原的含量都存在很大的變異. 所以, 用自然發病豬病變組織制作的自家組織苗, 其免疫效果存在很大的不確定性. 我們一方面無法判斷這種疫苗能否產生有效保護, 另一方面, 可能這批疫苗能產生有效保護, 但下批卻無法產生有效保護.
      1.2 疫苗滅活不徹底的風險. 自然發病的豬, 體質和抵抗力下降后, 很容易繼發或并發其他疾病, 所以, 自然發病豬的病變組織中, 大都含有多種病原. 這些病原對滅活條件的要求, 存在很大的差異. 以甲醛溶液為例, 需氧細菌滅活需要的濃度為0.1-0.2%, 厭氧細菌滅活需要的濃度為0.4-0.5%, 病毒滅活需要的濃度為0.05-0.4%, 而且, 豬瘟病毒用甲醛溶液滅活效果不理想. 所以, 制作不同的疫苗, 對滅活劑的種類和滅活劑的濃度要求是不一樣的. 種類選擇不合理, 無法達到滅活的效果. 濃度太低, 滅活不徹底; 濃度太高, 破壞抗原的免疫源性, 使免疫效果變差. 現在很多豬場制作自家組織苗, 都是使用0.3-0.4%的甲醛溶液(有的豬場甚至使用0.3-0.4%福爾馬林, 甲醛含量僅相當于0.1-0.15%), 這種滅活方法, 無法保證疫苗中所有的病原都被滅活. 尤其是使用病料組織制苗這種方法, 病料組織無法徹底過濾, 疫苗中含有大量組織破碎后形成的有機物質, 滅活不徹底的問題就更普遍.
      疫苗滅活不徹底, 將給豬場帶來如下兩方面的風險:
      1.2.1 造成疾病在豬場中傳播. 疫苗中未滅活的細菌或病毒達到一定數量, 就可能造成這些疾病在豬場流行, 而且這種流行屬于人工感染后的流行, 病源的致病力比自然感染時更強, 也更難以控制. 在目前應用自家組織苗的豬場中, 已知最起碼有一種疾病是由于使用滅活不徹底的自家組織苗而傳播的. 豬副嗜血桿菌作為一種兼性厭氧菌, 對使用福爾馬林滅活的濃度要求很高, 雖然目前仍無法獲得在使用病料組織制作自家苗(疫苗中含有較多組織物質, 滅活濃度肯定要比細菌分離培養制苗時濃度要高)情況下, 使豬副嗜血桿菌滅活所需甲醛含濃度的準確數據, 但我場曾經做過自家組織苗的攻毒試驗, 使用經過0.4%甲醛溶液滅活的自家組織苗和未經甲醛滅活, 但經過殺菌處理(每1000ml加入阿莫西林500mg+氟苯尼考250mg)過的自家組織苗, 分別對健康豬作大劑量攻毒試驗(每頭豬分左右頸部肌肉注射20ml), 都曾經成功地誘導出典型的豬副嗜血桿菌癥狀.
       1.2.2 免疫耐受的風險. 低劑量的病毒感染, 是免疫耐受的重要誘因. 前面我們已經分析過, 豬瘟病毒使用甲醛溶液滅活, 無法實現徹底滅活的目的. 如果用于制作自家組織苗的病料中含有少量豬瘟病毒, 這些病毒含量低至不足以引起豬瘟流行, 但卻可能誘導豬群產生豬瘟免疫耐受, 使豬瘟在豬場呈非典型和散發流行. 目前, 很多豬場豬瘟免疫效果都比較差, 是疫苗質量問題? 免疫操作問題? 還是由于使用滅活不徹底的自家組織苗所帶來的豬瘟免疫耐受問題? 值得我們進一步探討.
       2 科學決策
正因為自家組織苗存在上述系列的風險, 所以, 對于豬場是否應該使用自家組織苗, 應持非常慎重的態度, 并堅持以下三條原則:
       2.1 細菌性疾病不要使用自家組織苗.通過細菌分離培養的辦法制作自價苗, 不但成本低, 而且可以克服自家組織苗的所有缺點, 所以, 對于細菌性疾病, 完全沒有必要采用采集病豬病變組織制作自家苗這種方法.
       2.2 對于病毒性疾病, 如果市場有正規的, 且免疫效果確切的疫苗供應, 就不應該選擇使用自家組織苗. 豬瘟, 偽狂犬等烈性病毒性疾病, 當前國內市場上都有免疫效果確切的疫苗供應, 只要豬場從正規渠道選購, 并規范免疫操作, 一般都不會出現這些方面的問題. 目前國內市場上尚沒有正規的疫苗供應, 或者雖然已有正規的疫苗供應, 但免疫效果尚存在爭議的病毒性疾病, 僅限于藍耳病和圓環病毒, 而且這兩種疾病又是豬場最難以對付的疾病, 所以, 自家組織苗的使用, 大都僅限于針對這兩種疾病的預防.
       2.3 只有確證藍耳病或圓環病毒在豬場致病的情況下, 才可考慮使用自家組織苗. 藍耳病和圓環病毒雖然在豬場廣泛存在, 但并不是在所有豬場都致病, 很多豬場其實僅僅是豬群健康帶毒. 那些自稱藍耳病或圓環病毒正在流行的豬場, 可能并不真正是藍耳病或圓環病毒. 可以肯定的是, 曾經很多人都認為是藍耳病的一些癥狀(如毛毛豬, 耳朵發紺等), 其實是由豬副嗜血桿菌所引起的.
       判斷豬場是否需要制作自家組織苗的依據, 不是豬場是否存在藍耳病或圓環病毒病原, 而是這些病原是否在豬場致病. 確證藍耳病或圓環病毒在豬場是否致病, 最直接和最有效的辦法, 就是獸醫學上常用的人工攻毒方法. 按本文第3節所述的攻毒步驟, 對健康豬進行攻毒試驗, 并認真觀察攻毒豬的癥狀, 如果經過7-10天后, 攻毒豬出現藍耳病或圓環病毒癥狀, 說明這些病原在豬場確實致病, 需要制作自家組織苗. 否則, 說明通過嚴格的飼養管理, 豬場完全可以控制這兩種疾病, 不需要制作自家苗.
      3 制苗作方法潛在的改良途徑
理論上, 現行自家組織苗存在的這些缺點, 是可以利用獸醫學的方法進行改進的. 改進的方法, 就是人工攻毒提純病料, 具體步驟如下:.
      3.1 攻毒豬的選取: 選擇健康, 且經過2次以上豬瘟, 口蹄疫, 偽狂犬, 流感等重要烈性傳染病免疫的小豬或中豬2-3頭, 嚴格隔離飼養, 欄舍每天消毒, 飼料中添加藥物預防細菌性疾病.
      3.2 攻毒病料的選擇和制備: 選擇藍耳病或圓環病毒癥狀典型的病豬一頭, 摘取病豬的肺, 脾和淋巴結, 除去結締組織和病變不典型部分, 按照制作自家組織苗的步驟, 并按每300g病料制苗1000ml的比例, 對病料進行搗碎, 過濾和稀釋(有必要說明的是, 很多豬場在制作自家組織苗時, 都忽視了一個細節: 搗碎機高速運轉, 溫度上升很快, 夏天溫度高時, 容器中的病料很容易超過40oC, 使蛋白質發生變性, 破壞病原的免疫源性. 故夏天制苗時, 病料, 加入搗碎機中的生理鹽水和用于水浴冷卻病料的冷水, 都應預先在冰箱中經冷凍過), 稀釋后的病料懸浮液不經甲醛滅活, 而是每1000ml加入氟苯尼考250mg+阿奇霉素250mg (應該注意的是: 阿奇霉素禁止在獸醫臨床上應用), 充分攪拌均勻, 放入37oC恒溫箱中殺菌24小時, 再放入冰箱中冷藏備用.
       3.3 攻毒: 攻毒豬隔離飼養7天后, 觀察無異常, 即可進行攻毒. 取3.2制備的攻毒病料, 每頭待攻毒豬分左右兩側頸肌注射攻毒病料各10ml(即每頭豬20ml).
      3.4 攻毒病料的提取: 已攻毒豬再經隔離飼養7-10天后, 開始出現癥狀, 此時即可解剖病豬提取病料. 正常情況下, 從攻毒豬提取的病料, 比自然感染豬的病變更典型. 特別是在從攻毒豬提取病料進行再攻毒后, 第2代和以后各代提取的病料, 病變將更加典型, 基本上都是理想的制作自家苗材料, 而且每頭豬的病料基本都保持一致.
       通過人工攻毒方法產生的病料, 由于攻毒劑量比自然感染時大, 每頭豬的攻毒劑量又基本相當, 故病豬發病典型, 抗原量較多, 而且每頭豬病料中抗原含量變異度小, 其免疫效價和穩定性必然大大超過自然發病豬的病料. 同時, 攻毒豬都經過其他疾病的嚴格免疫, 所提取的病料比自然發病豬更純凈, 避免了污染其他病原而造成疾病擴散和免疫耐受的風險. 雖然要以健康豬作代價, 但一頭豬的病料可制作1000ml以上的自家苗, 保護300頭以上小豬, 經濟上還是比較合算的.
       理論上, 由于攻毒病料是從本場的病豬提取, 并沒有外來的傳染源, 只要對攻毒豬嚴格隔離飼養和消毒, 一般不存在病原擴散的問題.
當然, 這種自家組織苗的制作方法, 在生產實踐中是否會造成病原擴散, 仍有待有關專家進一步論證和檢驗. 生產場要推廣應用這種方法, 必須嚴格執行國家有關獸醫防疫的法律和法規, 得到有關獸醫防疫和和食品安全部門的許可。

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作者簡介: 冷和平 1965年---, 江西高安人. MBA碩士, 華南農業大學獸醫專業博士(在讀). 1988年華南農業大學畜牧系畢業后, 一直在豬場從事技術和管理工作, 主攻豬場飼養管理和獸醫技術.