É 型鴨肝炎病毒變異株的鑒定

peteryuanfeng

1 周, 在四免1 周后, 采血分離血清, 置-   20℃保存。按
此程序制備兩個批次血清, 一次為兔抗C80 和E28 的
血清, 二次為兔抗C80 和E63 的血清。陰性血清取自
未免疫健康兔。
1.  4　人工致病試驗　取1 日齡鴨, 經腿部肌肉注射
DHV  強毒, 0.  5 m lö只, 觀察7 天。用1 日齡雛鴨盲傳
1 次, 取有典型DHV  病變的肝臟制成勻漿并加抗生
素, 用7 日齡鴨返強 2 代。以此比較E3 和C1 的致
病性。
1.  5　PCR 和R T 2PCR 　檢測E8, 以D PV M LV  為對
照, 用PCR  擴增鴨瘟病毒的U L 6 基因, 核酸提取、引
物設計、PCR 反應條件和程序均參照文獻[ 6 ]。用R T 2
PCR 擴增禽流感病毒的N P 基因, 委托農業部獸醫診
斷中心檢測。
1.  6　免疫電鏡　取E63 的尿囊液, 10 000 röm in 離
心60 m in, 留上清, 45 000 röm in 離心3 h, 用少量T ris
鹽酸(0.  01 m o l,  pH  7.  4) 懸浮沉淀, 超聲波裂解, 12
000 röm in 離心30 m in, 取上清, 1 份上清液中加4 份
兔抗E63 血清, 4℃過夜, 12 000  röm in 離心30 m in,
取沉淀用雙蒸水懸浮, 經醋酸鈾負染, 透射電鏡觀察。
1.  7　交叉中和試驗　用固定血清2稀釋病毒的方法
在雞胚上進行。抗血清置60℃ 30 m in 后, 用生理鹽水
稀釋1∶5。將病毒用滅菌生理鹽水進行10 倍系列稀
釋, 每個稀釋度病毒液分別與等量陰陽性血清混合,
37℃反應1 h, 每個稀釋度接種5 枚雞胚, 0.  2 m lö胚,
觀察7 天, 記錄雞胚死亡數, 按常規方法計算抗體中
和效價以及毒株間的相關系數[ 7,  8 ]。試驗分兩次, 分
別用E28 和E63 與C80 進行比較。
2　結果
2.  1　人工致病試驗　在初代接種中, 待檢病毒E3 和
É 型強毒C1 均未致死1 日齡雛鴨, 但盲傳一代后, 待
檢毒株的死亡率達60% , DHV  É 型強毒的死亡率為
10% , 此后用7 日齡鴨傳代時, 待檢毒株的致死率均
為100% , 而DHV  É 型強毒僅有10%～ 40% 的死亡率
(表1)。
接種后24 h 內, 雛鴨表現精神沉郁, 死亡多發生
于接種后24～ 96 h, 接種144 h 后, 存活鴨常恢復正
常。瀕死鴨側臥于地, 頭頸搖晃, 雙腿反復蹬踢, 表現
出典型的DHV  癥狀, 部分死亡鴨呈角弓反張。死亡鴨
的肝臟稍腫大, 有多少不等的出血點, 存活鴨未見明
顯病變。