不同pH條件下植酸酶的酶活

JH_C · 發表于 2008-7-22 13:17:10

請問有哪位同仁做過或知道：同一來源（黑曲霉或大腸桿菌）的植酸酶在PH5.0與PH5.5所測得的酶活力差異有多大？

JH_C · 發表于 2008-7-22 15:21:02

各位做的標準空白和樣品空白的吸光值一般是多少?一般在什么范圍內為正常？

柳粒橙 · 發表于 2008-7-22 16:48:21

不是很清楚，期待高手。

baici0000 · 發表于 2008-7-22 23:47:14

沒側過，關注中...

tgz5637 · 發表于 2008-7-23 14:48:14

這問題問得有語病！應該是在不同的緩沖鹽體系里，在pH5.0及pH5.5 條件下，的酶促活性差異多少？  差異大小根據pH--酶活性曲線而異。
有興趣的話，可以配不同的緩沖鹽及模擬胃酸環境條件，測最適pH的差異, 應該是不同。
概念糾正：許多宣傳其植酸酶在PH2.5和5.5有兩個峰值。（在分離提純純酶的條件下測得的結果，與離體狀態下的產成品性狀不同。）  并沒有明確說明是什么條件下測得的數據！受緩沖鹽離子類型和濃度影響，在不同的緩沖鹽體系下，最適pH點不同（發生左偏移或右偏移），測定值不同。故此最適pH只是酶的非特征性常數。在檸檬酸鹽緩沖鹽pH5.5條件下測定值低于乙酸鹽緩沖鹽pH5.5條件下測定值，也是這種因素影響造成。到了動物胃腸道，又是有不同的最適點，所以不要太看重某pH點的大小，要結合 pH-穩定性和pH--活性兩條曲線看。
按我檢測的產品成品，有的是確有兩個峰值，但有的已有所偏離2.5點、5.5，有的根本就只有一個峰值，宣傳資料里卻胡吹,估計那個編資料的瞎掰的，也是個姓南郭的。
  一些植酸酶有兩個pH峰值，應該是有兩種類型催化結構域。測過的幾個酸性pH峰值都低于PH5.5（弱酸）峰值。

[ 本帖最后由 tgz5637 于 2008-7-23 15:13 編輯 ]

cswjs · 發表于 2008-7-23 16:20:29

PH5.0標準下測的酶活如為5000，用PH5.5標準下測則在4000-4200這個范圍，所以市場上的同樣為5000酶活的植酸酶，各個廠家檢測標準不一樣，質量也不一樣，價格也不一樣。
國際標準應該是PH5.5 。
呵呵，一家之言僅供參考！

[ 本帖最后由 cswjs 于 2008-7-23 16:26 編輯 ]

飛鴿 · 發表于 2008-7-23 17:01:52

這個東西的酶活測定玄的很，以前我們送4個樣國外去檢測，我們國內某牛B植酸酶居然測出來沒有酶活，后來幾經查找，才發現檢測方法不一樣。本人一直覺得這個酶最玄，呵呵，有江蘇一公司用了植酸梅以后，不加氫鈣，長勢良好。

JH_C · 發表于 2008-7-23 17:13:04

tgz老師，請再指點一下：
1、一般樣品空白的吸光值多少為正常，一些行內同仁告知大于0.15則不可取，而我我做的往往有0.19以上，是否試劑或配制有問題，另外，有時我做的樣品空白的OD比標準空白的還小，正常嗎？
2、用醋酸調節PH的緩沖體系是否比用鹽酸的更好，不知是否有差異。
3、在反應過程中，如果取半量進行，緩沖液0.9ml+反應液0.1ml+底物2ml+終止液2ml，理論上應該可行，但實際不知有否影響？
4、測得的吸光值在什么范圍為可取?

老板告我再做不好植酸酶的檢測，得讓我擦地板去了，嗚嗚嗚

tgz5637 · 發表于 2008-7-24 09:07:23

第一個問題我不懂。
第二個問題，復習下化學，鹽酸氫氧化鈉強酸強堿沒有緩沖力。而緩沖液濃度不同，緩沖能力不同，增加緩沖濃度，影響檢測。
第三個問題，減量檢測，時間也減半。還要驗證線性靈敏度，沒必要節外生枝。做檢查耗費時間的是試劑準備階段。
第四個問題，按分光光度計理論，在0.1～1范圍都是有效。