現代生物工程制劑：豬生長素釋放因子基因質粒

iamtao216

四川農業大學、東北農業大學、中國農科院畜牧所都曾做過大量關于豬生長激素釋放因子（pGRF）基因質粒的研究，本品在廣東、福建規模豬場試用效果顯著，斷奶至出欄階段增重可以提高7%-10%，料肉比降低0.2-0.3，明顯提高豬抗病能力，是生物技術給畜牧業帶來的革命性的產品，大大提高養殖效率。

豬生長素釋放因子基因質粒（安牠靈）

pGRF DNA Porcine Growth Releasing Factor DNA 豬生長素釋放因子基因質粒（獸用） 【藥品名稱】 通用名稱： 豬生長素釋放因子DNA 商品名稱： 安牠靈注射液 英文名稱： Porcine Growth Releasing Factor DNA 漢語拼音： Zhukangling Zhusheye 【有效成份】 本品主要成份及其化學名稱：雙鏈環狀脫氧核糖核酸(DNA) 化學組成 pGRF DNA由5,195堿基對組成。其堿基組成如下：

	A	G	C	T
堿基數目	1234	1344	1459	1158
%	24	26	28	22

質粒結構 pGRF質粒由下列各部分組成

	file:///C:/DOCUME~1/QINSHE~1/LOCALS~1/Temp/msohtml1/01/clip_image001.gif
			file:///C:/DOCUME~1/QINSHE~1/LOCALS~1/Temp/msohtml1/01/clip_image002.gif

載體序列

file:///C:/DOCUME~1/QINSHE~1/LOCALS~1/Temp/msohtml1/01/clip_image003.gifOri pUC19復制起點 KanR 卡那霉素抗性基因

GRF表達區

file:///C:/DOCUME~1/QINSHE~1/LOCALS~1/Temp/msohtml1/01/clip_image004.gifPromoter 豬骨骼α-肌動蛋白激活子和增強子 pGRF 豬生長素釋放因子和前導序列cDNA Poly A 聚腺苷酸信號和3’非翻譯區 質粒內切酶圖譜 利用內切酶圖譜鑒定pGRF質粒的結構，經內切酶切斷的pGRF，用瓊脂糖凝膠(1.2 %濃度)電泳顯現片段)。

內切酶名稱	內切酶位點	片段長度(bp)
Xho I	3	485, 2652, 2058
Hind III	2	4527, 668

file:///C:/DOCUME~1/QINSHE~1/LOCALS~1/Temp/msohtml1/01/clip_image006.gif 由左至右：第1和第27行：標記DNA (1 kb + Ladder,Invitrogen Inc.) 第2至6行：完整質粒 第7至26行：質粒的內切酶圖譜 【性狀】 本品溶于生理鹽水或鹽水加佐劑，呈無色透明液體。 【藥理作用】 該質粒為表達生長素釋放因子pGRF的載體。經肌肉注射后，目的基因pGRF具有在肌肉細胞內特異表達豬GRF蛋白的功能，刺激腦垂體產生內源性的生長激素(GH)，再促進類胰島素生長因子(IGF-1)分泌，通過促進仔豬小腸絨毛的發育，最終促進豬的生長和降低料重比,提高豬的生產性能。同時，還具有增強豬體的免疫力以及緩解細菌性引起的高熱肺炎癥的功效。 【毒理作用】 本品無致突變作用；在亞急性毒性評價中，對豬單次肌肉注射5倍正常劑量的pGRF DNA，連續135天觀察和檢測，受試豬無任何不良的生理生化反應；其血液學指標、血液生化指標和器官系數等檢測結果正常；病理組織學檢查未表現出劑量反應關系，也不發生隨試驗期延長而加重的變化，因此，對豬的亞急性毒性較小，試驗使用的劑量安全性較高。出欄時的殘留水平至少比先前建立的“安全口服劑量(20mg/kg)”還低6250萬倍。 由農業部農產品質量監督檢驗測試中心主持完成了急性經口毒性試驗、小鼠骨髓微核試驗、精子畸形試驗、Ames試驗、90天喂養(亞急性毒性)試驗及傳統致畸試驗，結果表明肌肉注射豬生長素釋放因子(pGRF) DNA生成豬肉食用性是安全的。 綜上所述，可以認為pGRF質粒對豬、人及環境都是安全的。 【藥代動力學】 本品注射入肌肉后，進入到注射部位的肌肉細胞，但不會整合到寄主細胞的基因組中，以非組合的形式存在并表達。藥效在注射后可持續至35天；在豬只出欄前，絕大部分質粒被降解消失, 注射部位的質粒殘留低于注射量的0.0003%。在注射后7日內,雖然有極少量漂散到心肝脾腎等內臟器官和血液中，但在血漿中DNA酶作用下很快全部被降解清除掉,各個臟器和血液內檢測不出殘留。 注射后35天，受試豬血液中GRF、GH和IGF-1含量水平得到提高，但都在正常生理范圍內。在出欄階段(注射后135天)，受試組與對照組已完全沒有差異。 【功能與主治】 提高生產性能，促進生長；降低料重比，提高飼料利用率；縮短生長周期，提早出欄以及不會降低豬肉品質；增強仔豬機體免疫力，提高仔豬對高溫的耐受性，緩解細菌引起的高熱肺炎，減少仔豬死亡率。 【用法用量】 肌肉注射。在仔豬35-40日齡時，一次性(臀部)肌肉注射2ml(含4.5mg)。 【不良反應】 注射本品無任何不良反應。 【停藥期】 考慮到質粒的殘留,豬出欄前一個月停止用藥。由于大中豬的注射增重效果不明顯,建議只對35-40日齡的仔豬使用。因此,實際使用中不存在停藥期問題。 【注意事項】 1 注射前針頭消毒。 2 每注射10頭，要更換針頭。建議使用16g規格的針頭。 3 插入(臀部)肌肉后，輕輕注射，并輕柔注射部位；盡量避免pGRF注射液回流溢出體外。 4 輕搖混勻pGRF注射液并待其溫度為室溫時使用。 【藥物相互作用】 未發現本品與其它任何藥物發生相互作用，造成藥效減低或其它毒副作用。 【藥物過量】 不建議過量使用，但使用過量也不會出現任何不良癥狀。 【規格】 4.5mg /2ml (支) 【貯藏】 4℃，避光密封保存。 【包裝】 50ml/瓶(25頭份/瓶)，20瓶/盒，6盒/箱 【有效期】 二年 【批準證書】中華人民共和國農業生物安全證書(生產應用)-農基安證字(2003)第008號 【生產企業】 企業名稱：香港格蘭柏生化科技有限公司 地 址：香港新界沙田生物科技路2號

boarsow

樓主：不好意思，我來給你潑潑涼水了！ 之前，我做論文的時候就有實驗室的哥們做的是pGRF，且不說其效果不確切，光注射質粒造成的豬只體內轉座子片斷的存在極易產生局部遺傳基因的改變。 豬肉是吃的，不是做試驗的，這樣的豬肉基因安全上存在一定的隱患。 我就不明白了，明明可以表達成蛋白質，干嗎不生產pGRF蛋白，卻一定要注射什么鬼質粒。 希望樓主慎重推廣

boarsow

由農業部農產品質量監督檢驗測試中心主持完成了急性經口毒性試驗、小鼠骨髓微核試驗、精子畸形試驗、Ames試驗、90天喂養(亞急性毒性)試驗及傳統致畸試驗，結果表明肌肉注射豬生長素釋放因子(pGRF) DNA生成豬肉食用性是安全的。 這個是忽悠，這些片面性的試驗不能保證DNA生成食品的安全性，基因突變是概率事件，不能用簡單的幾次試驗來確信！！:5s:

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搞成GRF蛋白就成激素了，殘留更厲害，還不方便使用，持續期較短，如果你沒有進行深入了解，請謹慎發言，沒有研究就沒有發言權。社會在進步，科技在發展，當初酶的使用不適也經歷了從認識到普及的過程嗎，任何新事物總要時間和實踐來檢驗。目前農業部已經給產品發了“轉基因安全證書”，安全性是沒有問題的，不要談轉基因就談虎色變，就像當初教會抵制“日心說”一樣。相信生物技術會給我們帶來更美好的生活和更高效的資源利用！ [ 本帖最后由 iamtao216 于 2008-4-11 14:10 編輯 ]

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豬生長激素釋放因子基因質粒(安牠靈)推廣中客戶關心問題解答 北京誠益農生物技術有限公司 新技術產品部 1. 安牠靈的產品性質、安全性？ 本產品由于其化學成分是核酸，是豬體內所本身所具有的物質，對豬的健康沒有任何危害，對畜產品安全和人類健康也沒有任何負面影響，也不會對環境生物安全有任何潛在隱患，是根本不同于“瘦肉精”類的綠色、安全、無公害產品，是生物技術對養豬業、對農民、對消費者帶來的福音。作為嚴格管制的農業轉基因產品，2000年1月向中國政府提出申請，2001年7月就被農業部“基因安全委員會”審批并發放中試批文。本產品的安全性是100%的。 通過“三致”檢測實驗表明，本品無致畸、致癌、致突變作用；在亞急性毒性評價中，對豬單次肌肉注射5倍正常劑量的pGRF DNA，連續135天觀察和檢測，受試豬無任何不良的生理生化反應；其血液學指標、血液生化指標和器官系數等檢測結果正常；病理組織學檢查未表現出劑量反應關系，也不發生隨試驗期延長而加重的變化，因此，對豬的亞急性毒性較小，試驗使用的劑量安全性較高。出欄時的殘留水平至少比先前建立的“安全口服劑量(20mg/kg)”還低6250萬倍。 由農業部農產品質量監督檢驗測試中心主持完成了急性經口毒性試驗、小鼠骨髓微核試驗、精子畸形試驗、Ames試驗、90天喂養(亞急性毒性)試驗及傳統致畸試驗，結果表明肌肉注射豬生長素釋放因子(pGRF) DNA生成豬肉食用性是安全的。 綜上所述，可以認為pGRF質粒對豬、人及環境都是安全的。 2. 安牠靈在實際生產中的效果？ 經華南農業大學、四川農業大學及廣東、河北、浙江、福建等地各大豬場等先后對本產品在養豬生產上的使用效果做的長期、大量的精確測定表明，本產品的作用效果主要表現在以下幾個方面： 加快商品豬生長速度。綜合使用結果表明本產品可提高生長育肥豬增重7%～10%，或提前豬90千克出欄時間7～15天，節省飼料40～50千克/頭，加快豬群周轉，提高出欄率，每頭豬可增加效益70～120元，投入產出比1:2.0～4.0。 改善商品豬胴體品質。本產品對商品豬胴體品質有明顯的改善作用，可使瘦肉率提高3%～6%，眼肌面積提高10%～14%，三點背膘厚降低5%～8%，并增加肌間脂肪，改善肉質風味，使豬肉品質提高一個等級。 另通過生產實踐發現，本產品還可以增強仔豬機體免疫力，提高仔豬對高溫的耐受性，緩解細菌引起的高熱肺炎，降低仔豬死亡率。 3. 安牠靈的注射是否會影響豬場免疫程序？是否影響其它疫苗的效果？ 經華南農業大學、廣東東進農牧集團惠東豬場試驗和使用結果，注射本產品可以促進仔豬的細胞免疫，增加淋巴細胞的含量，增強白細胞的吞噬作用，提高機體抗病能力；另和豬瘟疫苗、偽狂犬疫苗、PRRS疫苗等豬場常用苗同時注射，能增強疫苗效價，提高抗體滴度。因此注射本產品不會對其他疫苗效果造成不良影響，不會影響豬場正常免疫程序。 4. 安牠靈注射后有無不良反應？ 經大量推廣實踐證明，本產品注射后無過敏、應激等不良反應。 5. 是否會對肉質產生影響？對豬生長發育產生影響？ 四川農業大學關于pGRF基因質粒對商品豬肉質性狀的影響研究結果表明，注射本產品均可降低背膘厚，增大眼肌面積。且其肉色和大理石紋評分均在3～4分的正常范圍內。45min pH值均高于5.8，24h pH值均低于6.0，都在正常范圍內。滴水損失值也正常。這表明，商品豬注射本產品對胴體品質有提高，能提高豬肉等級，但對肉質無不良影響。 華南農業大學研究表明，商品豬注射本產品后心、肺、腎、肝、脾等內臟器官生長發育正常，無不良影響。 6. 安牠靈注射后對豬群管理和飼料有什么特殊要求？ 商品豬注射本產品后要加強豬群健康監測，保證豬群健康，這也是保證產品效果的基礎；飼喂采取自由采食、保證清潔飲水；飼料養分全價、平衡；如可稍提高蛋白比例(1%～2%)，并適量提高賴氨酸比例，這樣可以保證機體蛋白合成效率，則能更好發揮產品效果。其他飼養管理程序按豬場原有程序進行，無特殊要求。 7. 注射日齡，中大豬注射有沒有效果？ 本產品非激素類產品，完全按照動物生理特點發揮效果，因此注射－轉化－表達－發揮效果有一個較長的過程。通過生產實踐證明，商品豬35日齡、50日齡、65日齡、80日齡注射本產品后，生產效果呈階梯狀下降，35日齡注射效果最佳。因此建議在仔豬階段注射，在中大豬階段使用本產品投入產出比較小。 [ 本帖最后由 iamtao216 于 2008-4-19 15:17 編輯 ]

iamtao216

這么好的東西就沒人關注？在原料、飼養成本高漲的情況下，應該進行一些變革。