免疫增強劑在雞疫病防制中的應用

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免疫增強劑是先于抗原或與抗原同時應用，能非特異性地改變或增強機體對抗原的特異性免疫應答，能增強相應抗原的免疫原性或改變免疫反應類型，而本身并無抗原性的物質。現已證明，具有免疫增強作用的物質不下幾十種，常用的有左旋咪唑、西咪替丁、甲硝唑、蜂膠、福氏佐劑、油佐劑、維生素Ｅ、轉移因子和干擾素、白細胞介素等 ［ 1-2 ］ 。陳如明等 ［ 3 ］ 研究報道，黨參多糖、柴胡多糖、黃芪多糖、香菇多糖、當歸多糖、玉米花粉多糖、銀耳多糖等植物性多糖及黃芪、靈芝、麥飯石、甘草、白術、人參、黨參、茯苓等中藥對免疫系統也有刺激作用，可以提高免疫系統組織細胞的活性，增加機體免疫細胞的生長及抗體的合成，從而提高機體的抗病力，維持機體內環境平衡，具有明顯的免疫增強作用。 1 化學類藥物 1.1 左旋咪唑 左旋咪唑是第 1 個被發現具有免疫調節作用的人工合成化合物，具有廣泛的免疫調節活性，促進細胞免疫和體液免疫。左旋咪唑能增強正常雞體液免疫應答反應，使雞抗胸腺依賴性抗原抗體滴度，抗非胸腺依賴性抗原抗體滴度均明顯升高。 (1) 左旋咪唑對雞新城疫疫苗的免疫增強作用。喬彥良等 ［ 4 ］ 研究結果顯示高母源抗體雛雞首次免疫雞新城疫（ Newcastle disease,ND ）活疫苗前或疫苗免疫后配合應用 10 mg/kg 體重左旋咪唑對前期血清抗雞新城疫病毒 (Newcastle disease virus,NDV) 抗體滴度無明顯影響，但能延長抗體高峰水平維持時間。 ND 疫苗二次免疫前應用 10 mg/kg 體重左旋咪唑，血清內抗 NDV 特異性抗體明顯升高。 （ 2 ）左旋咪唑對馬立克氏病疫苗的免疫增強作用。喬彥良等 ［ 5 ］ 報道疫苗免疫同時應用左旋咪唑明顯促進馬立克氏病疫苗接種雞細胞免疫和體液免疫功能，用藥后外周血 T 淋巴細胞轉化明顯增強，血清內抗 MDV 特異性抗體明顯升高。 （ 3 ）左旋咪唑對雞傳染性法氏囊病疫苗的免疫增強作用。韓雪清等 ［ 6 ］ 報告雛雞免疫前應用左旋咪唑 (3.8,0.38,0.038 mg/kg) ， 7 d ～ 14 d 后即表現出免疫增強作用，單用雞傳染性法氏囊病 (Infectious bursal disease,IBD) 及 IBD+ND 疫苗聯合免疫時可使抗 ND 、 IBD 抗體水平明顯升高，且左旋咪唑具有頡頏 IBD 弱毒疫苗對 ND 疫苗免疫的干擾作用。喬彥良等 ［ 7 ］ 報告左旋咪唑處理 IBD 雞，可促進其增重，恢復脾及法氏囊免疫活性細胞，用于正常雞也可增高法氏囊重量指數 (B ∶ B) 及脾重量。

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1.2 西咪替丁為高效選擇性H2受體頡頏劑，在人醫臨床廣泛用于抑制胃酸分泌，促進胃腸道潰瘍康復。H2受體不僅僅局限分布于胃腸道，也廣泛分布于淋巴細胞表面。因此，人們對西咪替丁調節組織胺的免疫抑制作用及其對免疫應答的其他作用進行了研究，證明西咪替丁具有促進機體免疫功能的廣泛作用。研究中發現西咪替丁明顯促進雞體液免疫和細胞免疫功能。在細胞免疫中，特異性抗原可刺激淋巴細胞釋放巨噬細胞移動抑制因子（macrophage inhibiting factor MIF），使巨噬細胞功能活化，并抑制其游走運動，組織胺能抑制致敏淋巴細胞生成MIF，西咪替丁能拮抗組織胺對MIF生成的抑制作用。研究中首次觀察了西咪替丁對正常雞細胞免疫的影響，發現西咪替丁明顯促進正常雞體內T淋巴細胞增殖，使CD4+細胞百分比升高，CD8+細胞百分比下降，CD4+/CD8+細胞比值升高，使雞外周血淋巴細胞IL-2活性明顯升高，表明西咪替丁明顯促進雞細胞免疫功能。在體液免疫中，西咪替丁促進小鼠抗SRBC抗體產生；可使破傷風毒素免疫小鼠體內破傷風抗毒素滴度明顯增加；可使免疫原性較弱的抗原誘導的抗體滴度明顯升高。研究結果表明，西咪替丁均明顯促進機體抗胸腺依賴性和非胸腺依賴性抗原抗體的產生，增強機體體液免疫功能。（1）西咪替丁對雞新城疫疫苗的免疫增強作用。免疫ND活疫苗前配合應用西咪替丁可明顯頡頏母源抗體對疫苗免疫的影響，使機體維持較高抗體水平；疫苗免疫后配合應用西咪替丁可明顯加速抗體高峰水平的到來，并使抗體高峰水平維持時間延長。疫苗二次免疫前應用西咪替丁明顯促進ND疫苗接種雞體液免疫功能，用藥后血清內抗NDV特異性抗體明顯升高［4］。（2）西咪替丁對馬立克氏病疫苗的免疫增強作用。研究結果顯示疫苗免疫同時應用10 mg/kg～100 mg/kg體重西咪替丁明顯促進馬立克氏病疫苗接種雞細胞免疫和體液免疫功能，用藥后外周血T淋巴細胞轉化明顯增強，血清內抗HVT特異性抗體明顯升高［5］。 1.3 甲硝唑為臨床上常用的抗微生物和抗寄生蟲藥物，研究發現其也具有免疫調節活性，喬彥良等［8］研究結果顯示高母源抗體雛雞首次免疫雞ND活疫苗免疫前配合應用10 mg/kg～100 mg/kg體重甲硝唑可明顯頡頏母源抗體對疫苗免疫的影響，使血清抗NDV抗體滴度維持較高水平。疫苗免疫后配合用甲硝唑可明顯加速抗體高峰水平的到來，并使抗體高峰水平維持時間延長。雞ND疫苗二次免疫前應用10 mg/kg～100 mg/kg體重的甲硝唑可明顯促進雞ND疫苗接種雞體液免疫功能，用藥后血清內抗NDV特異性抗體明顯高于未用藥對照雞。

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2 多糖、糖苷及復方中藥 黃芪多糖（ astragalus poly saccharide ， APS ）能顯著促進雞脾和腔上囊的發育，這與目前許多有關 APS 對免疫器官發育影響的研究結果相一致（李先榮， 1989 等；花象柏等， 1993 ）。研究表明， APS 不但可以促進機體正常免疫器官的發育和免疫活性細胞的生成，提高免疫活性，而且能抗免疫抑制劑對免疫器官的損害或修復受損的免疫器官，使免疫器官的組織結構恢復正常水平，維持機體的正常免疫機能。 研究表明， APS 分別與雞 ND Ⅰ系苗、 ND Ⅳ系苗、 ND 油乳劑苗和 IBD 凍干苗以肌肉注射、皮下注射、點眼、滴鼻不同方式配合使用，均可使雞血清 ND 和 IBD 抗體效價在相同日齡、不同日齡、不同 APS 用量 3 種情況下顯著高于未使用 APS 組，顯示了明顯的免疫增強作用。國內近 20 年來對近百種中草藥來源的多糖進行了化學和活性研究。許多試驗證實 APS 具有免疫調節作用，可顯著促進正常機體的抗體生成細胞數，提高血清 IgG 水平黃會嶺等 [9] 。試驗表明，在雞疫苗免疫中，將 APS 直接用作免疫佐劑或制成一定濃度的溶液作為疫苗的稀釋液，可以提高機體免疫力和疫苗保護率。而降低雞馬立克氏病的發病率和死亡率。 郝艷紅等 [10] 試驗表明， 1 日齡雛雞用馬立克氏病毒（ Marek ′ s disease virul ， MDV ）強毒 vMDV 人工感染并注射 APS 后，可使 MD 的發病率和死亡率下降，對照組分別為 42% 和 34% ，而 APS 組為 40% 和 13% ，顯著增強中樞、外周淋巴器官和主要實質器官的含硒谷胱甘肽過氧化物酶活性，明顯降低各器官組織中 LPO 的含量。劉永杰等 [11] 報道， 1 日齡 AA 肉用雛雞以 MD 強毒 vMDV 人工感染后， MD 發病率為 33.75% ，死亡率 11.25%; 而 vMDV 感染注射 APS 組雞的發病率為 17.5% ，死亡率為 5% ，且 IL-2 誘生活性和 T 淋巴細胞增殖反應顯著升高。劉紅麗等 [12] 報道， APS 通過增強機體抵抗力，調節自由基反應系統兩方面作用防止腫瘤發生，抑制 MDV 造成的損害。并且 APS 無毒無害，將之應用于 MD 的防治會起到明顯效果。 黃芪多糖和卡介苗（ bacille calmette guerin ， BCG ）能增強雞球蟲免疫保護力。在雞球蟲保護性免疫機制中，居于主導地位的是細胞免疫。細胞免疫應答主要是通過依賴胸腺的Ｔ淋巴細胞實現的。 BCG 和 APS 處理球蟲免疫雞后一周即可顯示其免疫增強作用，顯著提高 E ?玫瑰花環形成率和 T 淋巴細胞轉化水平，并維持在高水平上。這表明 BCG 和 APS 均具有顯著的免疫促進作用，能加速機體細胞免疫功能的發育完善，從而改善雛雞免疫應答能力較低的狀況，提高球蟲免疫的效果。沈志強等 ［ 13 ］ 研究報道球蟲免疫雞經 BCG 或 APS 處理后，在雞體內完成生活史循環的球蟲數量減少，克糞便卵囊數降低，攻蟲后抗球蟲指數明顯提高。 人參、黃芪、黨參、白術等中草藥配制成的中藥免疫增強劑，在臨床上取得了較好的增強免疫效果。現代方法研究證實，其增強免疫作用的機制與神經系統、垂體腎上腺皮質系統的功能有關（花象柏等， 1993 ）。人參皂甙對小鼠、大鼠及豚鼠等多種動物單核?巨噬細胞系統吞噬功能均有明顯的激活作用；黃芪既能促進淋巴細胞的轉化，又能增強單核?巨噬細胞系統的功能（鄧文龍等， 1983 ），使Ｅ?玫瑰花環形成細胞數增加，并能誘生干擾素，延長某些原代細胞培養和二倍體細胞存活的能力。中藥免疫增強劑不但可促進外周血液 ANAE+T 淋巴細胞總數的增值，而且能明顯提高輔助型 T 淋巴細胞的數量，較好地增強火雞皰疹病毒苗 (HVT) 對雞馬立克氏病的免疫效果。免疫增強劑的應用不但可促進Ｔ淋巴細胞的增殖，而且可提高輔助型 T 淋巴細胞的比例，從而較好地改善 MD 的免疫效果。? 雞傳染性喉氣管炎（ Infectious laryngotracheitis ， ILT ）疫苗免疫會引起雞紅細胞免疫功能的短暫性降低。 Siegel 在 1981 年提出了紅細胞免疫系統假說理論，認為紅細胞表面有許多與免疫有關的的物質，如 CR1 、 CR3 、 CD58 、 CD59 等，紅細胞有識別、黏附、殺傷抗原、清除免疫復合物 (circulating immune complexes) 的功能，參與機體免疫調控，遞呈抗原，促進白細胞的免疫功能，并有完整的自我調控系統，紅細胞是機體免疫系統的重要組成部分。現代紅細胞免疫理論認為，在許多疾病的發病機理中，紅細胞免疫缺陷和免疫功能低下占有很重要的地位。健康雞經傳染性喉氣管炎疫苗免疫后， RBC-CR1 花環率和 RBC-IC 花環率明顯降低，說明 ILT 疫苗免疫會引起機體紅細胞免疫功能短暫性下降。中藥免疫增強劑能夠提高 RBC-CRl 花環率和 RBC-IC 花環率 , 并可激發機體在免疫后很快產生較高濃度的抗體。李繁等 ［ 14 ］ 試驗證明，中藥免疫增強劑與 ILT 疫苗同時應用，能夠消除 ILT 疫苗免疫引起紅細胞免疫功能降低的過程 , 提高疫苗的免疫效果。 3 花粉 大量試驗證明，花粉對促進免疫器官發育、增強免疫細胞活性、提高機體免疫功能有很好的效果（李存德等， 1987 ）。據王維義等（ 1987 ）報道，油菜蜂花粉能明顯增強大鼠、小鼠、豚鼠對綿羊紅細胞的免疫應答反應，提高機體的抗體水平。以油菜素內酯為主要成份的油菜蜂花粉提取液制劑——“ 906 ”免疫增強劑具有明顯的增強巨噬細胞功能的作用（賀澄日等， 1994 ）。賀澄日等 [15] 研究證明，“ 906 ”免疫增強劑能顯著提高雞新城疫 I 系苗免疫后的抗體水平，且在 30 d 內維持與油乳劑新城疫疫苗相近的免疫效果。目前新城疫油乳劑疫苗的價格是Ⅰ系苗的 30 倍。若能將價格低廉、具有明顯提高 I 系苗 HI 抗體效價的“ 906 ”免疫增強劑做為佐劑，與Ⅰ系苗配合研制具有免疫效果好、作用時間長的新型疫苗，應用于雞新城疫的防治，則可大大降低防疫費用，提高經濟效益。 4 蜂膠 蜂膠的藥理作用主要有殺菌抗病毒、抗炎癥、鎮痛、抑制過氧化物生成等作用，并能激活機體免疫防衛系統，促進抗體產生，增強巨噬細胞的吞噬能力，增加抗體再生功能，提高機體特異性和非特異性免疫力等。電鏡觀察可知，雞減蛋綜合征蜂膠滅活疫苗的超微結構主要為蜂膠顆粒吸附病毒粒子并相互交聯成類免疫刺激復合物結構，具有抗原“倉庫”作用和免疫刺激復合物作用。同時蜂膠顆粒與病毒粒子仍保持各自完整的形態結構，有利于被機體吸收后而發揮各自的功效和協同作用，這可能是該疫苗具有較長免疫期與保存期的主要原因。疫苗中有少量的裸露游離的病毒粒子和蜂膠顆粒，接種機體后均可迅速刺激機體產生免疫應答反應，這是該疫苗產生堅強免疫力時間早的主要原因。 據資料報道，雞體內 EDS ? 76HI 抗體價在? 6 log2 ?以上即可抵抗 EDS ? 76 病毒的感染。試驗用天然物質蜂膠代替傳統的化學物質為免疫增強劑制備的 EDS ? 76 蜂膠苗，免疫后 7 d 的 EDS ? 76HI 抗體價達 7 log2 ～ 10 log2 。因此，該苗 7 d 產生堅強免疫力，較傳統油苗提前 7 d ～ 8 d 。免疫后 14 d 可達 12 log2 ；免疫后 6 個月仍為 8.7 log2 ～ 9.8 log2 ；免疫后 10 個月～ 12 個月仍維持在 6.5 log2 ～ 8.0 log2 ，表明該苗免疫期可達 1 年。免疫攻毒試驗進一步證實了上述結果。而免疫后 14 d ，進口油苗 HI 抗體價為 6.5 log2 ～ 8.0 log2 ；國產油苗為 8 log2 ～ 10 log2 ；免疫后 6 個月進口油苗為 5.7 log2 ～ 6.2 log2 ；國產油苗為 6.5 log2 ～ 7.0 log2 ；免疫后 10 個月～ 12 個月，進口油苗為 3.2 log2 ～ 4.5 log2 ；國產油苗為 5.0 log2 ～ 5.5 log2 。上述比較試驗結果表明， EDS-76 蜂膠苗的效果顯著優于進口和國產油苗，區域推廣試驗表明，并替代進口，完全可以替代傳統的油苗，同時具有保存與使用更加方便的優點，具有廣闊的推廣應用前景 ［ 10 ］ 。 5 細胞因子 5.1 IL-2 IL-2 是一種糖蛋白，由活性輔助 T 細胞分泌，能提高細胞毒性防御，誘導干擾素產生，激活 B 淋巴細胞。 IL-2 在特異性免疫應答中起主要作用，誘導細胞因子產生，克隆增殖活化的 T 淋巴細胞伴隨抗原刺激后產生免疫記憶，同時誘導相應 B 淋巴細胞的克隆增殖和產生抗體的漿細胞和記憶細胞分化 [16] 。 李宏梅等 [17] 將重組雞 IL-2 與傳染性法氏囊病滅活苗聯合應用，每只雞肌肉注射重組 IL-2 0.4 mL ，同時肌肉注射 IBD 滅活苗 0.5 mL ，加入重組雞白細胞介素 2(IL-2) 后免疫效果進一步增強，抗感染效果達 100% ，其病變發生減少率達到 20% 。 孫圣蘭等 ［ 18 ］ 研究表明，雞的 IL-2 能增強雞傳染性法氏囊病毒 (Infectious bursa disease virus,IBDV) 多聚蛋白 DNA 疫苗的免疫原性。這主要表現在：①雞 IL-2 提高了 IBDV DNA 疫苗誘導的 T 淋巴細胞增殖反應的強度；②雞 IL-2 增強了 IBDV DNA 疫苗誘導的 B 淋巴細胞增殖反應的強度；③雞 IL-2 增強了 IBDV DNA 疫苗對強毒的免疫保護，緩減了 IBDV 的癥狀，其根本原因是雞 IL-2 增強了體液免疫和細胞免疫功能，當然也并不排除雞 IL-2 對 IBDV 的感染具有免疫治療作用的可能性。 雞的 IL-2 研究不但在研究雞免疫系統的發生及免疫調節機理中具有重要作用，而且在人類和哺乳動物的比較免疫學、生物發育和進化的研究中具有重要意義。因此，國內外學者對雞的 IL-2 進行了不懈的研究，在一些方面已取得了突破性的進展。姜永厚等 [19] 利用國內陳洪巖等 [20] 首次克隆得到的 IL-2 與新城疫弱毒 D26 株的 F 基因，經載體構建，將兩者以非融合蛋白形式共同克隆于真核表達質粒 pcDNA 上，成功構建了表達雞 IL-2 與新城疫 F 蛋白的重組質粒 (pcDNA-F-IL-2) 。用此重組質粒免疫雞，其表達 IL-2 可提高新城疫 DNA 疫苗的效力等 [21] 。 5.2 IL-18 IL-18 又稱為 IFN- γ誘導因子 (IFN- γ -inducing factor,IGIF) ，是新近發現的一種新型細胞因子，具有復雜的生物學功能，是細胞因子網絡中的重要成員。其生物學活性與 IL-2 相似，具有誘導 T 細胞和 NK 細胞產生 IFN- γ，促進 T 細胞增殖，增強 Th1 細胞及 NK 細胞、 CTL 細胞的細胞毒活性等多種生物學功能。張春杰等 [22] 研究表明其作為免疫增強劑不但具有明顯的增強 IBD 滅活疫苗誘導細胞免疫的作用，而且，對于中和抗體水平的提高， B 淋巴細胞增殖反應的加強也具有一定的作用，從而使疫苗的保護率從 86.7% 上升到 93.3% 。 6 結語 大量試驗結果證明，免疫增強劑與疫苗的聯合應用是增強疫苗保護效率的一個有效途徑，尤其是中藥免疫增強劑、一些細胞因子在免疫增強中越來越發揮重要作用。隨著分子免疫學等免疫學基礎理論的飛速發展，特別是 T 細胞對抗原識別的分子基礎和控制 T 細胞活化和功能專職應答的研究進展，使免疫增強劑的作用不再局限于增強免疫應答，而更著重于其誘導機體選擇性地產生有效防御相應病原體感染的特異性的免疫應答，減少抗原物質的副作用。因此，尋找特性確定、高效、穩定、無毒的理想免疫增強劑是當前免疫學研究的重點之一，隨著免疫增強劑的研究領域不斷拓寬，新成員、新劑型不斷發現，機理探討不斷深入，臨床應用范圍越來越廣，相信隨著研究的不斷深入，免疫增強劑在動物的疫病防治中會起到越來越重要的作用。 文章引自《動物醫學進展》