水飛薊煎劑對ICR小鼠撲熱息痛肝損傷的保護作用

魁罡

劉占民　鞠雷　王曉丹
(1. 河北農業大學中獸醫學院，河北　定州　073000
2. 河北農業大學動物科技學院，河北　保定　071001)


　　中藥水飛薊為菊科植物水飛薊Silybum marianum (L) Gaertn的干燥成熟果實，味苦，性涼；歸肝、膽經。具有清熱解毒、疏肝利膽的功能，主要用于肝膽濕熱，脅痛，黃疸[1]。原產于南歐和北非，其植物學的顯著特征是葉表面有明顯的乳白色斑紋,所以又名乳薊[Milk thisthe]。水飛薊是歐洲民間的一種草藥,用于保肝。我國于1972年從西德引種紫花水飛薊，現已在陜西、黑龍江、遼寧、盤錦、北京等地種植[2]。早期的研究表明,水飛薊素作為抗肝損傷藥物,具有穩定細胞膜,改善肝功能的作用,對急慢性肝炎、肝硬變和代謝中毒性肝損傷具有較好的療效[3]。撲熱息痛(Paracetamol, Par)即對乙酰氨基酚(acetaminphen, AP)為臨床常用的解熱鎮痛藥。然而,大劑量應用則可引起動物和人嚴重肝腎損傷甚至死亡。水飛薊素難溶于水，是水飛薊發揮保肝作用的主要成分。水飛薊的水溶性成分對肝損傷是否具有保護作用，這方面進行的研究還很少。本試驗利用撲熱息痛所致肝損傷作為肝損模型,研究水飛薊煎劑保肝作用的強弱。

1 材料和方法
1.1 動物
30只23g左右的ICR小鼠，雌雄各半，本校李相運教授惠贈。


1.2 藥物和試劑
水飛薊購自河北安國藥市，經鑒定為正品，水煎兩次過濾，合并濾液，濃縮至1g生藥/ml。撲熱息痛（河北冀衡藥業有限公司），使用時40℃生理鹽水溶解，濃度30mg/ml。ALT、AST、MDA、GSH測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。考馬斯亮蘭購自河北保定海泰克生物技術有限公司。


1.3 主要儀器
756P型紫外可見分光光度計(上海光譜儀器有限公司)；722E型可見分光光度計(上海光譜儀器有限公司)；HH-4數顯恒溫水浴鍋（常州國華電器有限公司）；YXJ-2高速離心機（常州國華電器有限公司）。


1.4 試驗方法
撲熱息痛肝損傷模型參照文獻[4]并結合預試驗結果進行。健康ICR小鼠隨機分為正常組、撲熱息痛模型組、撲熱息痛加0.2ml藥液組、撲熱息痛加0.4ml藥液組、撲熱息痛加0.6ml藥液組。正常組和模型組灌服0.4ml生理鹽水，其它組按既定藥物劑量灌胃， 1次/d，連續灌5d，最后1次灌藥后8h，正常組腹腔注射0.4ml生理鹽水，其它組腹腔注射0.4ml（600mg/kg）撲熱息痛溶液。腹腔注射16h后稱量小鼠體重，眼球采血，頸椎脫臼處死小鼠。血樣4000r.p.m.離心15min，取血清。剖腹取完整肝稱重，取肝左葉一部分，用Bouin’s液固定；肝右葉一部分稱重，用冰生理鹽水制成10％肝組織勻漿，備用。


1.5 測定指標及方法
肝體重指數計算方法為：
肝體重指數＝肝重（mg）/體重（g）
按試劑盒說明書測定肝組織勻漿中MDA（丙二醛）、GSH（谷胱甘肽）的含量，以及小鼠血清中ALT（丙氨酸氨基轉移酶，GPT）、AST（天門冬氨酸氨基轉移酶，GOT）的含量。

2. 病理組織學觀察
腹腔注射注射撲熱息痛溶液模型組，可見明顯的脂肪變性，病理切片呈空泡狀；肝小葉結構破壞明顯，肝細胞腫脹,存在散在灶性壞死，炎性細胞浸潤較多；肝細胞索模糊。灌服水飛薊粗提物，脂肪變性明顯減輕，并且肝小葉結構完整，炎性細胞大量減少，組織結構破壞較輕。

3. 討論
撲熱息痛在體內經肝細胞色素P-450代謝,絕大部分產物與硫酸和葡葡糖醛酸結合,僅很少一部分生成毒性中間產物(N-乙酰-對-苯醌亞胺,NAPQI),與肝內GSH結合,以巰基復合物形式從尿中排出。在其攝入量超過機體代謝限度時,有毒代謝產物未能及時處理,就與肝細胞膜結合,引起細胞膜脂質過氧化反應,破壞細胞內鈣離子平衡,導致細胞死亡,造成肝損傷[5]。
腹腔注射撲熱息痛后，模型組肝體重指數、AST含量、GSH含量、MDA含量與正常組之間均有顯著差異，說明撲熱息痛對肝組織造成了較大損壞，可以作為研究藥理性肝損傷的模型。
水飛薊在肝炎的治療中應用廣泛，主要利用其難溶于水的成分水飛薊素。水飛薊素具有抗自由基活性、抗脂質過氧化作用、抑制NO的產生、抗GSH的排空作用、保護肝細胞膜、促進肝細胞修復、再生和抗肝纖維化作用[9]。由于具有強的抗氧化性活性，水飛薊素是一種重要的保肝藥物。
水飛薊煎劑對撲熱息痛所致肝損傷后的肝體重指數、ALT、AST、MDA和GSH有改善作用。各治療組肝體重指數減少，水飛薊煎劑能緩解撲熱息痛引起的肝腫大，減輕肝臟的損傷。當肝細胞膜受到傷害時，ALT、AST被釋放進血液，使血清中的含量增加。據報道ALT、AST升高水平與肝細胞損傷程度成粗略平行關系[6]。水飛薊煎劑能明顯降低血清ALT、AST含量，一定程度上修復受損的肝細胞膜。因此肝細胞膜的完整性增加了，血清中的ALT、AST隨之減少，從而達到保肝的作用。文獻報道，撲熱息痛主要是耗竭了肝內GSH而中毒[7]。從本實驗結果看來，模型組與正常組之間存在顯著差異，與前面的文獻結論是一致的。水飛薊煎劑能使小鼠體內GSH含量增加，因而當小鼠體內撲熱息痛經肝P-450代謝活化產生的NAPQI大量增加時，肝內大量的GSH便與之結合，從而增強了肝臟對撲熱息痛的解毒功能，使小鼠肝臟損傷減輕，并保護小鼠不發生撲熱息痛中毒死亡。MDA是脂質過氧化的最終產物,可嚴重破壞細胞膜結構,導致細胞腫脹、壞死,含量高低可反應氧化的損傷程度[8]。各治療組均顯著降低MDA含量，說明水飛薊煎劑有一定抗自由基與抗氧化作用，對撲熱息痛所致肝損傷有顯著的保護作用。
通過病理組織切片可見，水飛薊煎劑能改善撲熱息痛所致的肝脂肪變性，并且炎性細胞大量減少，肝組織結構相對于撲熱息痛模型組有較大的改善，肝細胞腫脹變輕。由試驗結果可知，高劑量組的保肝效果優于低劑量組。
由本試驗結果可知，水飛薊煎劑通過修復肝細胞膜，增加體內GSH含量，抑制脂質過氧化反應，來減輕撲熱息痛引起的肝損傷，但不能達到徹底的治療效果。由于水飛薊素難溶于水，導致煎劑中水飛薊素含量較少，其作用會受到影響。水飛薊煎劑具有一定的治療效果，說明煎劑中存在有保肝成分，有待于進一步研究。
參考文獻
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[4] 徐淑云.藥理實驗方法學[M].第二版,北京:人民衛生出版社,1991:502
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[7] Mincnell,et al.J pharmal Exp Ther, 1973，187(1)：211.
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