魚粉中揮發(fā)性鹽基氮和組胺的測(cè)定方法！

zhoushun

個(gè)人認(rèn)為沒多少使用價(jià)值，最好發(fā)點(diǎn)在用、實(shí)用、容易操作的方法。

nissian54

好資料，下載學(xué)習(xí)學(xué)習(xí)。

柳粒橙

這兩個(gè)其實(shí)都是反映魚粉是否腐敗的指標(biāo),但是我們公司只測(cè)VBN,組胺不測(cè),成本高.

yangxiaodong

還有沒有更好的。

yangxiaodong

魚粉會(huì)不會(huì)漲價(jià)

hfdywj

多謝樓主的組胺測(cè)定方法。前幾天正在找呢

又見新月

本人正在研究 化驗(yàn)方面的東西

yjia810

VBN用的比較多

長(zhǎng)江之水

魚粉的新鮮度是個(gè)很重要的指標(biāo),不亞于其它指標(biāo).

田玉安

1、        組胺的測(cè)定
原理： 魚粉中組胺用三氯乙酸提取，之后調(diào)PH=9，將游離的組胺用正戊醇提取出，之后再用HCL反萃取，用偶氮試劑顯色。
組胺+三氯乙酸鹽（溶于水）-（PH=9---組胺（溶于正戊醇）-----HCL----正戊醇（組胺溶于稀HCL）
1、        組胺的測(cè)定
收集水相（下層）于20ml刻度試管內(nèi)，用水定容至刻度，搖勻，吸取1.00ML（2ML）鹽酸提取液于10ML比色管中，加入碳酸氫鈉溶液（50g/l）3.0ml搖勻，振蕩下加入偶氮試劑3.0ml，用水定容到刻度，室溫下顯色10min，用1cm比色皿于480nm下測(cè)定吸光度。
1、        組胺的測(cè)定
偶氮試劑的配制
甲液：稱取0.5g對(duì)硝基苯胺，加5ml鹽酸（1+1）溶解，再加水稀釋到200ml，置冰箱中（2~8度）保存。
乙液：亞硝酸鈉溶液5g/l，臨用現(xiàn)配
甲液5ml、乙液40ml混合后立刻使用。
1、        組胺的測(cè)定
步驟（1） 樣品處理
  稱取1~3克魚粉于具塞三角瓶?jī)?nèi)，加入25ml三氯乙酸（100g/l）每隔30分鐘搖動(dòng)一次，稱取3小時(shí)，過濾，取濾液2ml或1ml于15ml試管內(nèi)，加氫氧化鈉（250g/l）5滴，振蕩一下，再加5ml正戊醇振蕩2分鐘，靜止分層（如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象可滴加2~3滴無水乙醇），用移液槍小心吸取上清液（正戊醇層）于50ml分液漏斗內(nèi)，下層沉淀再分別用鹽酸（1mol/l）5ml、5ml、3ml反萃取3次。
步驟2：標(biāo)準(zhǔn)曲線法
稱取磷酸組胺樣品（Sigma公司）2.7671mg，置于100ml容量瓶?jī)?nèi)，用水溶解并定容到刻度，此液組胺含量為10ug/ml，分別取此標(biāo)液0.00、1.00、2.00、4.00、6.00ml于5支10ml比色管內(nèi)，各加鹽酸（1mol/L）1.0ml，振蕩，用水定容到刻度，搖勻后放置10min（室溫下），用1cm比色皿于480nm下測(cè)吸光值。
參比液：試劑空白
計(jì)算公式：
                                     C*100              
(m/25.0)*(1.00/15.0)*1000

實(shí)例：魚粉2.3455，取三氯乙酸提取液1.00ml，吸光度A=0.257
標(biāo)準(zhǔn)曲線:A=0.012380*c+0.01310
計(jì)算:c=(A-0.0131)/0.012380=19.70ug
組胺=[19.70/(2.3455/25)*(1.0/15)*100=315mg/100g=3150ppm
應(yīng)用：
    進(jìn)口白魚粉：組胺<10mg/100g(1~5mg/100g)
    進(jìn)口水產(chǎn)級(jí)蒸汽魚粉<100mg/100g(50mg/100g)
    優(yōu)質(zhì)國(guó)產(chǎn)魚粉<150mg/100g(50-150mg/100g)
    新鮮度差的魚粉(國(guó)產(chǎn),進(jìn)口)組胺200~340mg/100g
用于乳豬料的魚粉 組胺<100mg/100g

2揮發(fā)性鹽基氮的測(cè)定(VBN)
原理:蛋白質(zhì)分解時(shí)，氨基酸脫氨基生成氨，氨基酸脫羧基生成胺，氨與胺在堿液中被蒸發(fā)出來，用硼酸吸收，用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸反滴定，測(cè)出其含量。
步驟：稱取5-10g樣品于250ml具塞三角瓶?jī)?nèi)，準(zhǔn)確加入100.00ml水，振蕩30min，過濾，取慮液10.00ml，按粗蛋白蒸餾操作，但加入的堿為氧化鎂溶液（10g/L）5-8ml。
計(jì)算：
揮發(fā)性鹽基氮（VBN）（mg/100g）=[c（V-V0）/m*（10/100）*100
實(shí)例：魚粉樣品8.6706g，VHCL=0.0200mol/L  V=3.93ml   V0=0.015ml
       VBN={[0.0200*10/100]}*14*100=122.1mg/100g
應(yīng)用：
    新鮮度好的魚粉VBN<100mg/100g（40-80）
    新鮮度差的魚粉VBN>150mg/100g（180-350）
乳豬料魚粉VBN<100mg/100g
飼料中免疫球蛋白lgG的測(cè)定
      --------高效液相色譜法
1 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用高效液相色譜法儀測(cè)定飼料中免疫球蛋白IgG含量的方法
本標(biāo)準(zhǔn)適用配合飼料、濃縮飼料、含Ig的飼料原料（包括血漿蛋白粉、雞蛋粉等）中免疫球蛋白IgG的測(cè)定
本方法檢出限：當(dāng)取樣1g，稀釋至25ml，進(jìn)樣量20ul，檢出濃度為0.2mg/ml
2 原理
根據(jù)高效親和色譜的原理，在磷酸鹽緩沖液條件下免疫球蛋白IgG與配基連接，在PH2.5的鹽酸甘氨酸條件下洗脫免疫球蛋白IgG。
3、試劑
除非另有說明，在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑，水為去離子水或相當(dāng)純度的水，應(yīng)符合CB/T6682三級(jí)用水的規(guī)定
3．1磷酸二氫鉀
3．2 磷酸氫二鉀
3．3流動(dòng)相A：PH6.5，0.05mol/l磷酸鹽緩沖液
4.4 流動(dòng)相B：PH2.5，0.05mol/l甘氨酸鹽酸緩沖液
4．5IgG儲(chǔ)備標(biāo)準(zhǔn)液：
稱取IgG標(biāo)準(zhǔn)品（Sigma）0.0100g，用流動(dòng)相A（4。3）溶解并定容至10ml，搖勻，濃度為1.0mg/ml
4．6IgG工作標(biāo)準(zhǔn)溶液：
取IgG標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用流動(dòng)相A（4。3）稀釋成含IgG0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mg/ml
的標(biāo)準(zhǔn)系列。臨用時(shí)配制。
5 儀器和設(shè)備
5．1 實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備
5．2PH計(jì)
5．3超純水裝置
5．4勻漿機(jī)
5．5高效液相色譜儀：具紫外檢測(cè)器和梯度洗脫裝置
6試樣制備
按GB/T14699飼料采樣，選取飼料樣品至少500g，四分法縮減至少100g，磨碎，通過0.28 um孔篩，混勻，裝入密閉容器中，避光低溫保存?zhèn)溆谩?br /> 7分析步驟
7．1試樣處理：
稱取一定量試樣（精確至0.0001），配合飼料、濃縮飼料時(shí)，稱取試樣2~5g；血漿蛋白粉稱取試樣0.1g；雞蛋粉稱取試樣0.5g，于茄形瓶中，準(zhǔn)確加入25ml流動(dòng)相A（4。3），用勻漿機(jī)勻漿5分鐘，取溶液10ml 于離心管中，以1000g（3500r/min）離心10min，通過0.45um微孔濾膜后進(jìn)樣
7．2測(cè)定：
7．2．1HPLC測(cè)定參數(shù)的設(shè)定：
色譜柱：Pharmacia HI-Trap Protein G柱，1Ml
波長(zhǎng)：280nm
進(jìn)樣量：20ul
7．2．2梯度洗脫條件
梯度洗脫見表1
7．2．3測(cè)定
7．2．3．1先用5倍柱體積的重蒸餾水或去離子水洗柱，再用10倍柱體積流動(dòng)相A（4。3）平衡柱，按洗脫程序進(jìn)行洗脫。
分別取7.1試樣處理液和4.4標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行測(cè)定，以色譜峰面積積分值做單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)定量。
8結(jié)果計(jì)算
8．1試樣中IgG含量按公式（1）計(jì)算：
  &#61472;&#61472;&#61472;&#61472;&#61472;&#61472;&#61472;Pi×V×c×Vst×100
Pst×m×Vi×V1×100
式（1）中：&#61559;&#61591;&#61591;試樣中IgG含量，g/100g；
           c——標(biāo)準(zhǔn)工作液（A.2.3）中IgG的濃度,mg/ml;
           P1——標(biāo)準(zhǔn)工作液峰面積值；
           Vst——標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)樣體積，uL；
           Pst——試樣峰面積值；
           Vi——試樣進(jìn)樣體積；u        L；
           V——試樣體積，mL；
           m——稱取試樣的質(zhì)量，g；
8．2 平行測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平行值表示，保留小數(shù)點(diǎn)后兩位有效數(shù)字。
9 重復(fù)性
      在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的測(cè)定值的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的15%。