動物體外診斷試紙卡在基地養殖場的應用的討論

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豬 疾 病 快 速 診 斷 試 紙 問 答

問：診斷試紙檢測的基本原理是什么？

玻璃纖維 金標墊 硝酸纖維素膜 吸水棉

抗 體

抗 原

抗 體

答：豬疾病診斷試紙采用免疫膠體金層析檢測技術——雙抗原夾心法對病毒抗體進行檢測。試紙采用一步法固相膜反應，當血清滴入加樣孔后，溶液開始向顯示窗口方向泳動，遇到干燥金標抗原溶解。血清中若含有相關的病毒抗體時，將會和膠體金標記的抗原形成免疫抗原抗體復合物，隨溶液一起層析移動。在顯示窗口的檢測線（T）處，復合物中的抗體被預先包被的純化抗原捕獲截留，復合物中的膠體金顆粒形成一條紫紅色線，如此則判定為陽性。線的顏色線深淺直接與抗體量的多少成正比。如果樣品中沒有相關的病毒抗體，則膠體金標記的抗原直接層析流過T處，T處保持白色，判定為陰性。溶解在樣品溶液中的膠體金標記抗原被攜帶繼續往前至質控線（C）時，被預先包被的抗體結合，形成一條紫紅色線，證明本試紙有效。操作原理示意圖見圖1所示，整個試驗僅需20分鐘。操作簡便、快速、準確、靈敏度高，直觀、結果容易判定。

圖1 免疫膠體金免疫層析原理示意圖

問：診斷試紙怎樣使用？有哪些使用的技巧與方法？ 答：① 采樣部位的選擇

表1 產品名稱、采樣樣本及結果判斷效價值

產品名稱	適用樣本	效價值
豬瘟病毒（HCV）	豬血清	≥對照卡中1∶16
豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）	豬血清	≥對照卡中1∶40
豬圓環病毒（PCV）	豬血清	≥對照卡中1∶16
豬偽狂犬病毒（PRV）	豬血清	≥對照卡中1∶40
豬口蹄疫病毒（ FMDV ）	豬血清	≥對照卡中1∶40
豬弓形蟲（TOXO）	豬血清

【注】：樣品采集部位的正確選擇對臨床樣品檢出的準確性具有重要影響！ ② 血清與血漿的區別？哪個檢測效果更好？

血清是血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內抽出，不加抗凝劑，則凝血反應被激活，血液迅速凝固，形成膠凍。凝血塊收縮，其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清，也可于凝血后經離心取得。

區別：1、在凝血過程中，纖維蛋白原轉變成纖維蛋白塊，所以血清中無纖維蛋白原；2、在凝血反應中，血小板釋放出許多物質，各凝血因子也都發生了變化。這些成分都留在血清中并繼續發生變化，如凝血酶原變成凝血酶，并隨血清存放時間逐漸減少以至消失。但大量未參加凝血反應的物質則與血漿基本相同。

為避免抗凝劑的干擾，血液中許多化學成分的分析，都以血清為樣品。建議您采用血清樣品，對檢測效果更加準確。

③ 實驗每次需要多少血清量？加入量是否有限制？

實驗每次滴加血清的量在2-3滴，數值在80-100 ul，由于檢測區內膜上包被抗原的量是固定的，加入量差20 ul對實驗的結果沒有很大影響，但試紙的液體飽和度有限制≤3滴，所以，您只需要往加樣孔加入2-3滴血清即可。

④ 實驗結果怎樣判斷？什么時間判定結果最合適？

對于豬疾病的診斷試紙，每種疾病的都有一張比色卡，在加入樣品后的20分鐘內，觀察窗內色帶與對照卡的色帶滴度進行參照，可大致判斷出抗體效價的高低。

⑤ 結果顯示后的說明情況，以豬口蹄疫病檢測為例：

1．被檢樣品檢測線（T）條帶的色澤≥對照卡中1∶40（效價）位置條帶色澤時，說明樣品中豬口蹄疫病毒抗體的滴度較高，暫不需要進行疫苗的接種免疫。 2．被檢樣品檢測線（T）條帶的色澤＜對照卡1∶40（效價）位置條帶色澤時，說明樣品中豬口蹄疫病毒抗體效價不夠抵御豬口蹄疫病毒強毒攻擊的最低保護滴度，該進行疫苗接種。 3．被檢樣品檢測線（T）處無明顯色帶出現，說明樣品中沒有豬口蹄疫病毒抗體。即使豬群健康，也應當及時進行疫苗接種 4．當被檢樣品檢測線（T）條帶的色澤特別深時，被檢豬即使接種了疫苗，也可能被強毒感染。 問：試紙在臨床上具體有哪些應用？ 答：1、用于檢驗疫苗的質量，以及確定免疫的最佳使用劑量 養殖者每次最好購買同一批號生產的疫苗。在進行疫苗質量檢測及確定最佳使用劑量的時候，從中取一瓶疫苗，選擇同一時間段的乳豬、仔豬、種豬若干頭，分別注射不同劑量的疫苗進行免疫接種，免疫后15天采血，用免疫金標試紙測定抗體滴度，根據測定后抗體效價值，從中選擇免疫頭份少，抗體滴度高作為本批號疫苗最佳免疫劑量。 如果效價值達不到免疫保護最低水平，則應當檢查是否是疫苗本身問題，亦或是豬群存在有免疫抑制病毒(如圓環病毒)等的干擾。 2、科學地制定仔豬的首免時間 仔豬的首免時間確定受許多因素的影響，如母源抗體的水平高低、仔豬是否吃到初乳或吃到初乳量的多少，確立仔豬的首免時間可以采用動態監測仔豬抗體水平的高低，不同豬群采用個性化的免疫程序，免疫膠體金試紙為動態監測提供了技術支持。 3、監測懷孕母豬抗體水平，為母豬及仔豬提供合理保護（以豬瘟為例） 當母豬分娩時，用豬瘟抗體免疫金標試紙條檢測母豬的抗體水平。如果豬瘟抗體效價＜1:16，說明母豬體內的豬瘟抗體滴度無法抵抗豬瘟強毒攻擊的最低保護抗體，母豬應當及時進行豬瘟疫苗接種，同時乳豬應當及時采用超前免疫，以免發生豬瘟病。如果母豬檢測豬瘟抗體效價＞1:16，說明體內的豬瘟抗體滴度較高，可以抵抗豬瘟強毒的攻擊，乳豬不需要進行超前免疫，乳豬可通過母乳獲得母源抗體而達到保護，乳豬可按照正常的免疫程序進行免疫保護。 4、對家畜流動性頻繁的地區，可開展疾病的前期篩查工作，減少傳染病的區域傳播 當從外地區或外省購進大批量仔豬或種豬時，購買者無法了解購買的豬只免疫情況。通過隨機抽選豬只，進行免疫金標試紙的快速檢測，根據檢測結果采取相應的措施，并且可以了解整群的免疫水平，為下一步的免疫奠定基礎，若是出現發病狀況，也能及時采取合理的防治措施，減少購買者的最低經濟損失。 5、懷疑豬場豬群發病，對發病情況的監測 懷疑豬場發生豬瘟病時，采集病豬血清（血液）用金標檢測試紙檢測。如果是發生豬瘟病時，檢測沒有抗體或抗體滴度很低，可作為發生豬瘟病的診斷參考。當然，發生過豬瘟病后痊瘉的，抗體滴度可能會很高。

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