快速估測(cè)尿酶活性法

chengcai790602 · 發(fā)表于 2007-6-24 18:42:31

目的：在有指示劑酚紅存在的條件下，豆粕（餅）中的尿素酶活性可按尿素轉(zhuǎn)變成氨的方法定性測(cè)定。

方法一：
儀器及試劑
1.培養(yǎng)皿
2.稀硫酸（H2SO4）0.2N或更稀些，帶滴管。
3.尿素——酚紅試劑。
將1.2克酚紅溶解于30ml0.2N的NaOH中，用蒸餾水將之稀釋至約300ml，加入90g尿素并溶解之，用蒸餾水稀釋至2l，加入14ml 1.0N的H2SO4或70ml o.2N的H2SO4，用蒸餾水稀釋至最后體積3l，溶液應(yīng)具明亮的琥珀色。
測(cè)定步驟
1.在一個(gè)150ml的燒杯中倒入少量試劑，注意溶液必須呈明亮的琥珀色。若溶液已轉(zhuǎn)變?yōu)樯罱奂t色，滴人稀硫酸深液并攪拌之，直至溶液再度呈境拍色。
2.量一場(chǎng)匙粉碎很好的豆餅粉，放置于培養(yǎng)皿中。
3.在樣品上加入兩場(chǎng)匙試劑，輕輕攪拌，將樣品平鋪于培養(yǎng)皿中。若仍有干豆餅斑點(diǎn)，則再加入試劑，直至將豆餅浸濕。
4.放置5分鐘后觀察：
a.沒(méi)有任何紅點(diǎn)出現(xiàn)：再任其放置25分鐘，若仍無(wú)紅點(diǎn)出現(xiàn)，說(shuō)明豆餅過(guò)熟。
b.少量紅點(diǎn)：少量尿素酶活性，豆餅可用。
c.豆餅表面約有25％為紅點(diǎn)覆蓋：少量尿素酶活性；豆餅可用。
d.豆餅表面約有50％為紅點(diǎn)覆蓋：有尿素酶活性。
e.豆餅表面的75％－100％為紅點(diǎn)覆蓋：尿素酶活性很高，不應(yīng)接受這種原料，因?yàn)槎癸炦^(guò)生。

方法二：
儀器與試劑
1.粉碎裝置（不強(qiáng)烈發(fā)熱）
2.天平：感量1%
3.試管：直徑18mm，長(zhǎng)180mm
4.尿素：分析純
5.酚紅：分析純 0.1%乙醇（20%）溶液
測(cè)定步驟
將所測(cè)試樣研細(xì)，稱去0.02g，轉(zhuǎn)移到試管中，加入0.02g結(jié)晶尿素及兩滴酚紅指示劑，加之20——30ml蒸餾水，搖動(dòng)10s。觀察溶液顏色，并記錄呈粉紅色時(shí)間。
尿酶活性結(jié)果表示：
1min內(nèi)呈粉紅色為——活性很強(qiáng)
1~5min內(nèi)呈粉紅色為——活性強(qiáng)
5~15min內(nèi)呈粉紅色為——有點(diǎn)活性
15~30min內(nèi)呈粉紅色為——沒(méi)有活性
一般在10min以上不顯粉紅色，尿酶活性合格，30min以上不變色說(shuō)明加熱過(guò)度；10min內(nèi)顯粉紅色說(shuō)明加熱不足，1min內(nèi)呈粉紅色說(shuō)明過(guò)生。

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