魚類細菌性疾病

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三、魚類細菌性疾病
3.5. Red spot diseases (赤點病)
本病正如其病名，以體表的點狀出血為其特徵。70年代初期首次被報告的，比較新的鰻魚細菌性疾病。本病不僅在臺灣、日本經常發生，80年代初期在英國也有此病的發生報告。
(1)病   因
        此病的病原菌乃由Wakabayashi和Egusa所報告的Pseudomonas anduilliseptica。此菌屬Gram陰性的短桿菌(0.5×1～3μm)。具有單鞭毛，有運動性。倍培養溫度超過25度以上時，運動性變弱或消失。使用普通培養基培養時，細菌增長速度緩慢，20度培養2～3天後，方產生直徑1mm左右的透明，具光澤且黏稠性的菌落。培養溫度范圍是5～30度，至適溫度15～20度。培養pH值范圍是5.3～9.7，至適pH值7～9。培養食鹽濃度范圍是0.1～0.4％，至適食鹽濃度是0.5～1％。本菌在淡水中生存日數不超過一天以內就死亡，但在海水或稀釋海水中可生存200天以上而不死亡。
(2)癥   狀
        病鰻皮膚，特別在下顎、腹部及肛門內周圍的皮膚有顯著的點狀出血。因病原菌侵入表皮基底膜或在真皮繁殖，使分布在表皮基底膜及真皮組織內的毛細血管充血，發生滲出性出血或破綻(裂)性塊狀出血病變。此外，尚可見鰭的出血，肝臟郁血，脾臟褪色萎縮，腎臟萎縮，腸管、胃變赤，腹膜點狀出血。有的病例可見各內臟貧血現象。
(3)診   斷
        根據病鰻典型的體表點狀出血之病理特徵，大概可以診斷為本病。但有些病魚的癥狀和其他細菌性疾病的癥狀類似，因此尚需進行細菌學診斷。
將疑似本病的鰻魚的肝、脾、腎臟或血液，用普通培養基培養進行細菌分離。20度2天培養後，如有透明感的菌落出現，則可進一步鑒定是否為本病原菌。用凝集反應和直接免疫營光法可以同定本病原菌。
(4)對   策
        飼養水溫保持在26～27度，池水盡可能使用淡水等是有效的對策手段。但保持水溫必增加燃料投資。理想的預防措施是使用疫苗，但實用性的疫苗尚待開產。
Chloramphenical等抗生素對本菌雖有較強的殺傷作用，但在養鰻場使用抗生素治療是有實際困難的。因為本病潛伏期較長，當發病時，病魚大都已失去食欲，經口投藥效果甚差。另外，本病常發生於剛剛過冬時，此時，鰻魚尚未開始攝食，也是經口投藥效果不佳的原因之一。
因此，設備完善的養殖池，可將水溫提高到26度，同時投藥治療，一般都會收到較好的治療效果。
　
3.6. Pasteureliosis (巴斯德桿菌癥)
本病1969年6月在日本西部 魚養殖場首次流行發生過，以脾臟出現多數，明顯的小白點為特徵，隔年，日本全國都流行發生本病，而且每年均有反復發生，被害甚大。
(1)病   因
        病原菌首次由本村和北尾兩位專家所分離，在美國大西洋岸也分離出同一性狀的病原菌。本病原菌Pasteurella piscide屬Gram陰性短桿菌(0.6～1.2×0.8～2.6μm)。但隨著培養條件的變化，有的呈球狀，有的呈長桿狀。此菌無運動性，無芽胞。
        在普通培養基上，本病生長不良。在血液培養基(含1.5～2.0％食鹽)上，則繁殖良好。BHI培養基上的菌落呈圓形、無色、半透明、露滴狀，且有黏稠性，在MaConky培養基上增殖良好，但在SS、BTB培養基上不繁殖。培養溫度范圍是17～32度，至適溫度25～30度。培養pH值范圍6.8～8.8，至適pH值7.5～8.0。培養食鹽濃度范圍0.5～5.0％，至適食鹽濃度2～3％。
(2)癥   狀
        病況進行急速，病魚先失去食欲，然後離開魚群，游入水池底部靜止不動而死亡。體表稍變黑，除了魚鱗脫落的體表有顯著的變色外，無其他可見的變化。剖解時，可見脾、腎臟上有多數的小白點，其他如心臟、肝臟、腸間膜、腹膜、鰾、鰓有時也會出現較少數的小白點。白點大小自針頭大至直徑數厘米大，但大多數在1厘米左右。白點為一個大菌落或幾個小菌落所組成，多被纖維組織包圍形成結節樣構造，內部細菌則已死亡。這些菌落乃由於細菌耐過白血球，內皮網狀細胞之吞食後，在病變部位繁殖起來的。在毛細血管及間質組織內，細菌雖然增殖快，但因不產生菌素，故對實質組織沒有太大的影響。
(3)診   斷
        內臟出現小白點的病變除本病以外，還有Nocardiosis，Ichthyophthyriasis。本病在肌肉中不形成結節或膿瘍，且肝臟及腎臟也不腫大，因此肉眼可以與Nocardiosis， Ichthyophthyriasis之發生區別。
確切的診斷還需以細菌檢查，血液涂抹標本及病變組織直接涂抹片等方法為輔助。如有兩端濃染的桿菌，則可判是本病。
(4)對   策
        因為傳染來源乃保菌魚、非海水，因此預防上，重點要盡快地除去重癥魚及病死魚。
Chloramphenical，Tetracyclin等抗生素對本病原菌有效，但磺胺劑則沒有殺菌效果。在梅雨期的易流行的季節里，應進行投藥預防措施，減少發病。
　
3.7. Bacterial gill disease (細菌性鰓病)
鰓組織表面上因長桿菌繁殖，刺激而引起的上皮細胞異常增生使鰓薄板愈合為本病的特徵。
(1)病   因
        Flavobacterium sp.是屬於Gram陰性長桿菌(0.3～0.5×5～15μm)，無運動性。分離時，一般使用cytophaga培養基，於18度培養5天後，可形成直徑0.5mm、淡黃色、半透明的微小菌落。菌落周圍圓滑，加入5％仔牛血清將促進細菌生長。培養溫度是10～25度，食鹽濃度是0～0.05％。
(2)癥   狀
        病魚食欲減退，離開魚群，浮於水面。病狀加劇後，分泌多量的黏液，將鰓蓋覆蓋使鰓郁血、腫脹。組織病理學所見，鰓組織細菌增殖，上皮細胞增生，特別是從鰓薄板先端開始，最後漸擴散到鰓板全體，使鰓薄板完全愈者，鰓瓣變為棒狀。以上病變，阻害血液中二氧化碳與水中氧氣的交換，使魚的呼吸受阻害，是魚死亡的原因。
(3)診   斷
        采集鰓瓣的一部份直接進行顯微鏡檢查，確認有無細長的細菌存在，上皮細胞的增生，及鰓薄板的愈合，就可以初步斷定本病。菌數不多或與組織緊密附著不能直接觀察時，則將采集的組織放在載玻片上涂抹，經固定、染色後再用顯微鏡檢查。
(4)對   策
        避免過密飼養是相當重要的。預防措施過去常用硫酸銅，有機水銀制劑來治療，但依公共衛生上而言現已廢棄不用了。目前一般可用過錳酸鉀(1～2ppm)，1小時藥浴。在日本用5％食鹽水浸漬2分鐘的方法也是非常有效且安全的。但規模大的養殖池則需消耗大量的食鹽。
　
3.8. Columnaris disease
        被Flexibacter columnaris感染的魚，首先在與外界接觸的器官：鰓、鰭、皮膚上出現病變。隨魚的種類、年齡等因素，病變常常出現於魚體不同的部位。因此常被稱之為gill diseases、cotton mouth等。此病不僅在日本，而且在美國、加拿大及歐洲都有發生。在美國和加拿大被稱之為summer disease。發病魚種多，危害甚大。
(1)病   因
        病原體是Flexibacter columnavis，屬Gram陰性長桿菌(0.5～0.7×4～8μm)。長時間培養後，細菌形狀不一，有的呈細長形、波浪狀或輪狀。此菌雖無鞭毛，但具有特異的運動性，即菌體一端固定，另一端擺動的屈曲運動和在培養基或載玻片上的滑走運動。
使用Cytophaga、TY培養基分離時，菌落呈周圍樹根狀、黃色扁平的菌落。用液體培養基靜止培養時，液表面上形成一層黃色的強韌膜。培養溫度范圍是5～35度，至適溫度27～28度。培養pH值范圍是6.5～8.5，至適pH值7.5左右。培養食鹽濃度0.5時發育良好，超過2％時將不發育。
(2)癥   狀
        癥狀隨魚種多少有些差異。首先在鰭、嘴吻、鰓板的先端或體表上出現黃白色的小斑點，然後漸次擴大。體表的患部周圍變赤，鰭白先端裂開。鰓黏液分泌劇增，鰓葉變成帚狀，部分出現脫落。其他內臟一般正常。
        皮膚患部因病原菌增殖，使真皮組織內毛細血管充血，最後破裂引起出血。真皮壞死時，魚鱗將脫落。
鰓板被病原菌感染，導致病魚呼吸困難，是致死的原因。本病和3.7.的Bacterial gill disease不同之處是鰓組織容易出現壞死現象。
(3)診    斷
        病變僅限於體表，易從外觀觀察病變來診斷。與霉菌感染有類似病變，但病巢表面上無霉菌感染之特異毛狀菌絲，卻附著黃色的黏液。鰓有病巢時，打開鰓蓋，也可以觀察到同樣的癥狀。從患部采集黏液，用400倍的顯微鏡，可以觀察到正在做滑走及屈曲運動的多數細長菌體，開始分散的菌體互相結合變成特異的圓柱狀。
病原菌的分離，培養將從患部采集的黏液涂抹於Cytophaga或TY培養基上，於25度培養48個小時。根據菌落的形態，基本上可以判斷為本菌。通常以抗血清，用凝集反應來做輔助診斷。
(4)對   策
        本病乃接觸而感染，特別是鰓及皮膚有損傷時易感染，因此流行期盡可能避免撈取或移動魚。
治療使用藥浴最有效。發病初期可以用磺胺劑及抗生素經口治療。雖有疫苗的研究報告，但距實用階段尚待進一步開發。
　
四、
4.7. 鯉魚鶪疹病毒感染癥 (Herpesirus Infection of Carp)
本癥是由病毒感染所引起的表皮性腫瘍，俗稱鯉魚痘(carp poo)，雖在1964年已由Schubert以電子顯微鏡在病變組織內發現了病毒顆粒，但病毒的分離直到1984年始由Sano完成。
(1)病   因
        由Herpesvirus cypirini所感染，本病的分離以EPC、FHM等細胞株，接種腫瘍組織的過濾上清，在20℃經2～3星期後，出現圓形化的病變細胞，并漸次細胞融解，在EPC細胞內可出現核內包涵體(即Cowdry type A)。
(2)癥   狀
        本病多發生在2公斤左右的成魚，於口吻周圍、鰭、皮膚等部位常發現突起腫瘤，不大引起死亡，卻對觀賞用的錦鯉魚造成觀賞價值的損失。組織病學上的病變，屬上皮乳頭腫(epithelial papilloma)，人工接種後所形成的腫瘤也有相同的組織變化。
(3)診   斷
        本癥病理組織變化屬epitealial papilloma的腫瘤構造，以病理診斷非常容易，但病毒的分離率依Sano等人自1981～1983年間，由8個病例成功地分離來看，如果能以病毒分離來輔助診斷則更能確診。本病毒由Sano等人更證實人工感染鯉魚經10個月有50～70％的再現率。
(4)對   策
        本病毒在魚體內呈不顯性的終身感染(latent infection)，去除本病毒的再傳染在目前是相當困難的事。養殖池的一般衛生管理仍是不可缺少的重要工作。
　
4.8. 鰻魚病毒感染癥 (Viral Infection in Eel)
自鰻魚已分離的病毒很多，由於其病原性及疫學多未確定，在此僅列表於表三(7月份刊出)并稍加說明。
由歐洲鰻(在歐洲所捕獲的幼鰻)之腎臟所分離的EVE病毒，其特性和前述的IPN(French 21 Strain)病毒一致，而且稍後也在日本鰻(在日本、亞洲各國所擄獲的幼鰻)被分離到，EVE病毒主要引起鰻魚之腎臟充出血，腎小管內蛋白滲出物出現及肝脾之壞死 ，鰓發紅、充出血等病變。由美洲鰻所分離的EVA病毒已知屬Rhabdovirus，臨床癥狀與歐洲EVE病毒類似，在日本曾發生自古巴進口的幼鰻死亡例子。
4.9. 病毒性紅血球壞死癥 (Viral Erythrocytic Necrosis)
本癥舊稱魚紅血球壞死癥(PEN)，現以VEN稱之。
(1)病   因
        本病毒屬Iridoviridae的DNA病毒，病毒顆粒大小，不同報告有很大的差異，Walker (1971)在鱈魚的報告是330nm，及在鶼魚的155nm，白鮭魚的230nm。但病毒的分離尚未成功。
(2)癥   狀
        在感染魚的紅血球細胞質內，可見1～4μ的嗜鹼性包函體為主要病徵，感染嚴重的病魚，其紅血球90～100％都有包涵體。由於紅血球嚴重的被破壞，死亡的魚所呈顯著貧血，病魚的紅血素值多降至2～10％左右。在一感染魚群，各慢性至急性病程都同時可被發現，特別是弧菌癥混合感染時，其死亡率、型態趨於復雜。
(3)診   斷
        因本病的病毒尚未分離成功，故其診斷得以血液抹片來檢查，抹片以Giemza或 Wright染色，在光學顯微鏡就可發現紅血球的質內包涵體。最終的確可利用電子顯微鏡檢查出iridovirus病毒顆粒的特徵。病毒顆粒大小，直徑154～300nm。
(4)對   策
        本病的傳播機序尚未十分明了，防治之對策只能依病毒疾病的一般措施進行。
4.10. 魚病毒學的一般實驗技術
(1)細菌之培養
        病毒分離所用的細胞，應正值分裂旺盛的正常細胞，且需同時使用2種細胞株供分離。細胞株應事先且定期確定未被Mycoplasma所污染。培養液內添加penicillin 100 IU／ml和Streptomycin 100μg／ml，或Gentamycin 100μg／ml和Mycostatin 25 mg／ml。
(2)病材之采取及處理

(a)自5尾病魚所采的病材，同一器官組織同時一起做成一個接種乳劑。盡可能的話，應采有上述之2個接種乳劑。
(b)同時采取不同魚群的病材供比照。
(c)病材之采取應根據下列之原則：
1. 孵化不久的幼魚得除去卵黃，使用全魚化驗。
2. 5cm未滿的幼魚，采取包括腎在內的全部內臟器官。
3. 5cm以上的成魚，只要采取脾及腎。
(d)為輸送及保存上的需要，可加入含倍量的抗生素的pH7.0～7.8緩沖液。
(e)為抑制及減少供檢材料之被污染，添加含800IU／ml之penicillin及800μg／ml之streptomycin，400units／ml之mycostatin緩沖液，在室溫2小時，或4℃一夜緩慢攪拌，或乳劑通過0.45μm小大的milipone。

(3)接種及培養
依各所使用的培養瓶或培養皿大小來接種多少量的乳劑，但至少每一個乳劑應接種2個培養瓶(皿)，培養時間應至少觀察14日以上。培養溫度如下：

(a)IHN、IPN、VHS病毒15℃。
(b)CCV病毒27～30℃。
(c)Herpesvirus salmonis病毒5～10℃。

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