豬的細菌性疾病-分子生物學引物設計思路

cym19790520

基于細菌16、23SrDNA的基因檢測法
    不論是細菌的16SrDNA，還是23S rDNA均由保守區和可變區構成。不同菌種間保守區序列差異較小，但可變區序列則隨菌間的親緣關系不同而有一定的差異，人們利用這一特性設計引物進行菌種鑒別。基因檢測的基本原理為：提取DNA→PCR擴增→純化擴增產物→凝膠電泳對產物進行檢測→測序循環→純化測序產物→序列數據分析。針對l6、23SrRNA基因的保守性和特異性特點，檢測可采用以下幾種方式：①兩種引物設計在保守區，成為通用引物，而在中間的特異區中選擇序列作探針。先用通用引物作PCR快擴增，可篩選出含有病原菌的標本。擴增產物再與種或屬特異性探針雜交，對靶細菌作出鑒定，可以達到診斷的目的。②兩條引物設計在保守區，在中間的特異區中，選擇一條或兩條特異性引物作套式或半套式PCR，然后用限制性內切酶進行酶切，結果產生了不同的酶切圖譜。該方法可較好地對臨床標本中的感染菌進行鑒定，其敏感度可達到檢測l0個大腸埃希菌或250個金黃色葡萄球菌的水平。③將一對引物中的一條設在特異區，而另一條設在細菌的高度保守區，檢測某一種屬的病原菌，運用這一方法檢測糞便中的艱難梭菌，可比培養法迅速得到準確的結果，可在l06個大腸埃希菌的背景下檢出l0個艱難梭菌，說明該方法具有很高的特異性。另外，也可直接在16SrRNA特異區中設計引物檢測各種特定病原菌，該方法應用較為廣泛，如檢測支氣管灌洗液中的軍團菌、皮膚活組織中檢測麻風桿菌、痰和咽拭子中檢測肺炎支原體等。

小人物

呵呵，不錯，只是引物設計在豬場不實用，有些太深奧了，大多數人只是想知道這東西有什么用？怎么用？結果怎么解釋？ 再說現場還沒有幾個豬場能夠使用PCR來檢測，過幾年也許會有的。:L

全會好

豬場使用PCR檢測,引物可以購買,設計有多難呀.