兩種檢測方法檢測豬偽狂犬病活疫苗免疫豬抗體試驗比較

nety 2007-7-1 18:34

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　　偽狂犬病是由偽狂犬病病毒引起的豬和其它家畜及野生動物的急性、致死性傳染病。臨床上以發熱、奇癢(豬除外)、腦脊髓炎為主要癥狀。豬偽狂犬病疫苗免疫及抗體檢測作為防治豬偽狂犬病的關鍵技術，在生產中得到了廣泛應用。本試驗采用病毒中和試驗和乳膠凝集試驗兩種方法檢測偽狂犬病活疫苗免疫豬，免疫10天、20天后的血清抗體水平。
　　一、材料與方法
　　1.偽狂犬病活疫苗由本廠生產，批號為200301001、200304002
　　2.試驗豬由本廠健康動物室自繁自養的檢驗用豬，體重35-50Kg，經采用乳膠凝集試驗(LAT)檢測偽狂犬病抗體陰性。
　　3.免疫方法將上述我廠生產的兩批偽狂犬病活疫苗，每批接種偽狂犬病陰性的健康敏感豬4頭。每頭肌肉注射lml(1頭份)，分別于免疫10天后、20天后采血分離血清。
　　4.血清稀釋先將待檢血清56℃水浴滅活30分鐘，然后再用稀釋液稀釋成1：4，1：8，1：16，1：32，1：64。
　　5.病毒—血清混合液將偽狂犬病活疫苗病毒液(200個TCID50/0.1ml)與上述不同稀釋度待檢血清分別等量混合，37℃水浴作用1小時以上。
　　6.接種細胞培養將已長成單層雞胚纖維細胞的培養瓶，傾去營養液，接種病毒—血清混合液0.1ml和維持液0.9ml。每個稀釋度接種4瓶，37℃培養。接種后24小時起觀察細胞病變(CPE)，觀察7日，記錄結果。以不出現CPE數和接種數的比為中和比值。按Karber法計算中和效價。
　　7.乳膠凝集試驗(LAT) 采用華中農業大學生產的豬偽狂犬病LAT診斷試劑盒，按其使用說明書檢測待檢血清LAT效價，記錄結果。
　　二、結果
　　1.兩批偽狂犬病活疫苗免疫40～50Kg健康敏感豬，免疫10天后血清中和抗體效價GMT分別為10、12；20天后血清中和抗體效價GMT分別為46、65.4。20天后血清中和抗體效價分別為10天的4.6倍和5.5倍。
　　2.兩批偽狂犬病活疫苗免疫40～50Kg健康敏感豬，免疫10天后血清LAT效價GMT兩批均為2.25；20天后血清LAT效價兩批GMT分別為5、5.4。20天后血清LAT效價分別為10天的2.2倍和2.4倍。
　　三、討論與小結
　　1.中和試驗作為偽狂犬病抗體檢測的經典方法，因具有特異性強，靈敏度、可靠性高等特點，被世界上許多國家列為偽狂犬病法定檢測方法。在本試驗中，偽狂犬病活疫苗免疫豬中和抗體效價免疫10天后均為8，全部轉陽。20天后偽狂犬病血清中和抗體效價均≥31，抗體水平上升較快，升幅在4倍以上。
　　2.乳膠凝集試驗(LAT)檢測豬偽狂犬病抗體具有簡便、快速，特異性較好等優點，其準確性相對來說差一些。兩批疫苗免疫豬10天后血清偽狂犬病抗體全部轉陽。20天后血清抗體升幅在2倍以上。
　　3.兩種方法測定的血清偽狂犬病抗體效價并不完全一致。有的血清中和抗體效價較高，而LAT效價卻較低。反之，有的血清中和抗體較低，而LAT卻較高。兩種方法測定結果并不完全相關。這可能與LAT檢測抗體準確性相對來說要差一些有關。