豬流感實驗室診斷方法匯總

bluewing2003

實驗室診斷
目前國內外的實驗室診斷方法有以下幾種。

1.）病原分離。

病原分離是最準確的診斷方法，但是缺點是確診時間長。由于豬流感病毒對外界的抵抗力很弱，因此對具有呼吸道癥狀豬進行病毒采集，并迅速進行分離，是病毒分離的關鍵。從活體內分離病毒可采用鼻粘膜拭子法。采集的拭子放在適當的運輸培養基如生理鹽水、PBS、MEM中盡快送往實驗室。病死豬則采集病變的上呼吸道和肺組織。樣品經常規無菌處理后接種雞胚或敏感細胞, 于33～35 ℃孵育48～72h后,收集尿囊液或細胞培養液進行HA試驗以證明是否有流感病毒的存在。若初代分離物無HA活性,則再盲傳兩代。用HI試驗和神經氨基酸酶抑制NI試驗可確定分離到的流感病毒的血凝素及神經氨基酸酶亞型。

2.）血清學診斷。

A：HA和HI實驗一般采取患豬急性期和恢復期（相隔10~21天）的雙份血清樣品，如恢復期抗體效價較急性期增加4倍以上，即表明感染了豬流感病毒。

B.酶聯免疫吸附試驗：是當前應用最廣泛的一鐘免疫測定方法。該方法具有使用方便，敏感性好，特異性高，可檢測抗原和抗體等特點。明尼蘇達州獸醫診斷實驗室（MDVL）發現，豬免疫后7天即能檢測出抗體，而HI試驗需7-10天，并且ELISA結果可直接由數據顯示出來，而HI卻要記錄，因此，他們更傾向于ELISA

C：熒光抗體試驗：將已與熒光劑相結合的豬流感抗體滴加在肺組織的冰凍片上，然后在顯微鏡下對切片進行觀察，鑒別被病毒感染的細胞。本試驗可以快速的獲得結果，并且具有操作簡單，費用較低等優點，在美國已廣泛使用。

D：免疫組織化學試驗：此試驗與熒光抗體試驗很相似，是將抗體滴加到甲醛上，然后在顯微鏡下觀察。本試驗和熒光抗體的靈敏性相當，不但可以檢測新鮮的病料，而且可以檢測尸檢時固定良好且送檢過程中沒有喪失組織完整性的病料。

3.）分子生物學診斷

快速診斷RT-PCR：美國Chio YK等建立了H1N1、H1N2、H3N2亞型SIV的RT-PCR方法。通過瓊脂糖凝膠電泳，RT-PCR對陽性樣品能產生唯一的陽性帶，而12種豬常見的呼吸道疾病均沒有產生擴增反應。本試驗快速、可靠，是豬流感診斷的有效工具。
4.) 動物試驗： 采取患豬的鼻液、氣管、細支氣管分泌物或死亡豬只的肺，按常規處理后，每只小白鼠或家兔顱內接種0.1~0.5毫升，或取0.5~2毫升腹腔或靜脈注射。顱內接種的動物在24~72小時后出現強直性或陣發性驚厥、痙攣或者死亡。腹腔或靜脈注射的動物，一般于12~48后進行剖解，可見肝壞死，肺腫大，