畜牧人
標題: GTC實驗室工作程序 [打印本頁]
作者: liuhong152 時間: 2011-5-18 21:27
標題: GTC實驗室工作程序
1．
打開電源：
打開水浴鍋、光密度儀、采精杯預熱櫥、電子稱、和顯微鏡的電源開關。
2．
搖勻貯精：
●
將貯存在精液貯存箱中的精液瓶輕柔搖動，使之懸浮均勻（早晚各一次）。
●
清點并記錄貯存精液的種類和數目。
●
同時檢查并注意保持貯存箱的溫度在16~18℃。（低于15℃會損害精子）
3．
檢查貯精質量：
●
用毛細管吸取待檢精液置于溫度為37℃水浴鍋中20分鐘。
●
在400倍顯微鏡下評估貯存精子的質量，活力不得低于60%、形態異常率不得高于15%，判定使用與否并作記錄。
4．
配制稀釋液：
●
根據當時的精液稀釋配制計劃，稱取一定量的蒸餾水，放入37℃的水浴鍋中預熱（每頭次輸精劑量為85~95ML，至少為70ML）。
●
將稀釋劑按1∶1與蒸餾水充分混勻，放入37℃水浴鍋中加熱。
●
稀釋液配制好后30分鐘至24小時內使用。
5．
采精前的準備：
●
先備采精杯放入預熱櫥。
●
預熱蓋玻片、載玻片到37℃，預熱稀釋液到37℃。將光密度儀調至待讀狀態。
●
查看公豬使用記錄表，結合配種計劃要求，確定可使用公豬及需稀釋的頭份。
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公豬每周采精一次，不得多于二次，純繁時需查看公、母豬系譜，防止近交。
6．
采精：
●
準備溫水和干毛巾。
●
根據公豬體高將假臺畜調至適當高度。
●
將采精公豬趕入采精欄。
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用溫水洗凈公豬下身，并用毛巾擦干。
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將手洗凈擦干，戴上采精專用手套。
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誘使公豬爬上假臺畜。
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待其將尿液和包皮積液排凈后，用手握成空拳導入陰莖，讓其抽動數次后，用手鎖住陰莖頭，順勢拉出。
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待其射精后，棄掉開始部分的膠體和清亮的副性腺液，收集富含精子的部分。
●
公豬射精時間一般為5~15分鐘，在沒有結束射精時，不要放開采精的手。
7．
原精的處理：
●
采精后去掉采精杯上的濾紙和黏液，注意避免雜物掉入精液，插入干凈的溫度計，測量精液的溫度并作記錄。
●
100倍顯微鏡下給精子活力評分，不得低于2，否則棄之不用。
●
用移液槍吸取定量原精，完全注入已用定量參比液調零的比色杯中混勻，
●
測定“OD”值，通過專用的“OD”值與密度值轉換表，查到精子密度，作記錄。
●
電子稱上量精液的凈重，得到所采精液的體積，作記錄。
●
鮮精鏡檢應在精液采用后10~15分鐘進行，注意避免陽光直射。
8．
精液的稀釋：
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計算可稀釋頭份=[體積（ML）×濃度（10 /ML）×精子活率÷40。
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根據計劃稀釋頭份計算稀釋液用量和精液需要量，并在電子稱上稱取所需體積的稀釋液（每份分裝體積為85~95ML）。
●
調整稀釋液的溫度使其與原精溫度相差不超過±1℃。
●
將所需體積的精液與稀釋液混合均勻。
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鏡檢稀釋后精子的活力不得低于60%，精子形態異常率不得低于15%，否則不可用。
9．
包裝與貯存：
●
用吸耳球將稀釋的精液吸入虹吸導管并棄掉開始部分液體。
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分裝需緩慢進行并注意注入精液瓶的精液量和瓶蓋的質量。
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在瓶身寫上公豬耳號和采精日期。
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分裝好的精液待其逐步冷卻至室溫后放入17℃精液專用保溫箱貯存。
10．
工作記錄：
●
填寫公豬使用記錄表和公豬使用記錄卡。
●
填寫采精記錄表內容包括采精日期、采精者姓名、公豬耳號、收集類型（部分或全部）、采精量、采精質量和備注（公豬健康狀況和性欲等）。
11．
設備儀器的清洗及保養：
及時清洗精液配制過程中使用的析具和儀器，并用蒸餾水過濾，將廢物、廢液及時處理，注意避免清洗劑與精液配制用具接觸，注意保持實驗室干燥與衛生。
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