<strike id="imseu"></strike>

畜牧人

抗菌肽的基因工程表達（一）

  天然抗菌肽主要來自昆蟲，但其提取過程甚為復雜。一般需將蟲體研磨、離心，上清液再經鹽析、葡聚糖凝膠層析等一系列步驟純化，才能去除其他雜蛋白，而產物濃度和回收率都不甚理想。用基因工程方法可以簡化上述步驟，且產量可獲明顯提高。

  基因的構建及表達 ： 目的基因的獲得可以從動物體中提取RNA，將其反轉錄擴增后得到cDNA，利用此方法已經得到豬抗菌肽PR-39基因；或根據抗菌肽氨基酸殘基種類和其殺菌活性的相關性，替換某幾個氨基酸或將2種抗菌肽基因結合構造雜合肽。如將cecropin Bl5和17等位點的氨基酸替換后，其抗菌活性明顯提高；cecropin A N端1～7位和Milittin N端5～12位氨基酸雜合后，其產物具有熱穩定性和高抑菌活性。

大腸桿菌表達系統基于大腸桿菌的原核表達系統是迄今在基因工程領域中應用最多、也最完善的系統，但運用該系統表達抗菌肽則遇到很多困難，主要表現在2個方面。一是抗菌肽的宿主細胞毒性。宿主細胞表達的抗菌肽會反饋性地抑制大腸桿菌等宿主細胞的增殖，從而影響抗菌肽的進一步表達；二是容易被降解。由于抗菌肽本身帶有大量正電荷，因而對蛋白酶非常敏感，在表達胞中容易被降解，難以實現大量表達。融合表達是解決上述問題的主要方法。xu等以pTRX為載體，在大腸桿菌BL21中以與硫氧還蛋白(TRX)融合的方式表達了38個氨基酸殘基的家蠅肽Mdmcec，目標蛋白用腸激酶切割下來，再用HPLC進行純化，最后獲得了11．2 mg／L的產量。但大腸桿菌表達產物均以包涵體的形式存在，需將細胞超聲破碎后透析純化，給后續處理帶來困難。