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畜牧人

鴨病毒性肝炎卵黃抗體生產工藝對其使用效果的影響

                       山東信得科技股份有限公司

家禽業(yè)務部   李峰
262200

                         青島研發(fā)中心 趙風立 266061

肉鴨養(yǎng)殖經過10多年的快速發(fā)展，已經成為畜牧養(yǎng)殖中的重要板塊，其年均增長率（約10%）遠高于肉雞，市場高峰期年出欄量更是超過了30億只；但是相對于肉雞，肉鴨科研乏力，經費投入不足，育種水平與國外相比仍有差距；營養(yǎng)及生理研究工作也剛剛起步，專用生物制品的開發(fā)速度以及疾病防控技術也跟不上產業(yè)的發(fā)展。簡易的鴨舍、落后的設備、粗放的管理、傳統(tǒng)的技術很難生產出高質量標準的鴨肉產品，農村規(guī)模化飼養(yǎng)戶由于缺乏系統(tǒng)而全面的技術培訓，生產過程中普遍存在著缺乏隔離、消毒、預防、治療等綜合防疫措施的全面落實，給鴨病毒性肝炎等傳染病的爆發(fā)提供了溫床。

鴨病毒性肝炎(Duck virus hepatitis,DVH)病原為鴨肝炎病毒 (Duck epatitis virus,DHV)目前歸屬于小RNA病毒科的未確定種。ＤＨＶ具有 3個在抗原性互不交叉、無相關性，有著明顯差異 ，無交叉保護和交叉中和作用，但引起的病狀與病變甚為相似的血清型 (Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型 )。我國于1958年首次在上海地區(qū)某些鴨場發(fā)現(xiàn)鴨肝炎，迄今已流行半個多世紀，1984年郭玉璞等證實我國鴨肝炎流行株為Ⅰ型。ＤＨＶ-I型又稱古典株 , 此病毒流行甚廣，呈世界性分布，主要侵害3周齡以內的雛鴨，發(fā)病急、傳播快、死亡率可達死亡率為 50%～9 0%。

鴨肝炎病毒對氯仿、乙醚、胰蛋白酶和PH3.0都有抵抗力，在56℃加熱60min仍可存活，在37℃中能抵抗2%來蘇兒作用1h和0.1%福爾馬林8h，在15～20℃中的1%福爾馬林或2%NaOH中能存活2h，在2%的漂白粉溶液中能存活3h，3%酚、碘制劑可使病毒滅活。在自然環(huán)境中，病毒可在污染的孵化器肓雛室中存活10周，在陰濕處糞便中存活37d以上，在4℃存活2年以上，在－20℃則可長達9年。

近年來，美國、印度、法國等國家已發(fā)現(xiàn)Ⅰ型 D H V的變異株， 美國已對其分離物進行了比較，證明其確為Ⅰ型 D H V的一個變異株，命名為 B a rn - h a r d t株，與DHV-Ⅰ型在中和試驗中呈部分交叉反應。1992年Sandhu也發(fā)現(xiàn)一類毒株，與Ⅰ型僅有部分血清學相關性，稱之為Ⅰ型的變異株，命名為Ⅰa型。2007年，中國、韓國和臺灣的學者也先后報道和證實了DHV-Ⅰ型的變異。

我國自1958年發(fā)現(xiàn)本病至1996年前后，各地暴發(fā)與流行的鴨肝炎，其疫情均可以被標準DHV-I型疫苗及抗體良好控制。但近幾年來，在許多暴發(fā)鴨肝炎的鴨場和地區(qū)，針對Ⅰ型的主動免疫（疫苗）或被動免疫（抗體）并不能有效地保護雛鴨抵抗DHV的感染（林世棠，蘇敬良等）。目前全國養(yǎng)鴨密集地區(qū)正在大面積流行的鴨病毒性肝炎，其部分毒株的毒力有所增強，抗原性發(fā)生了變異，使得所流行的DVH發(fā)病日齡、發(fā)病死亡率均有增大傾向，采用鴨病毒性肝炎卵黃抗體的防制效果出現(xiàn)多樣化，常發(fā)生防治失敗，給養(yǎng)鴨業(yè)造成了重大經濟損失。本文將就鴨病毒性肝炎卵黃抗體生產工藝對其使用效果的影響展開論述。

隨著養(yǎng)鴨業(yè)的發(fā)展，疾病種類越來越多，某些病原體的變異也越來越快，雖然疾病控制手段越來越多，也越來越先進，但疾病感染壓力卻越來越大，疾病互傳的可能性也越來越大，畜禽疾病仍舊是影響?zhàn)B殖效益和人民健康的重要因素之一。無論政府部門還是養(yǎng)殖業(yè)戶、組織都迫切需要有相應的快速有效的對策來控制疾病的發(fā)展，降低死亡，減小損失。毋庸置疑，外源性的特異性抗體是治療某些特定傳染病的最直接最快速最有效的方法。卵黃抗體作為一種價廉易得的外源性特異性抗體，其使用效果已經在臨床獸醫(yī)學上得到了驗證和認同。但為什么在畜牧生產實踐中，越來越多的人卻對鴨病毒性肝炎卵黃抗體的使用效果產生了懷疑，到底出現(xiàn)了什么問題？難道實踐不能檢驗“真理”了嗎？信得科技集團山東信得科技股份有限公司作為動保行業(yè)的領先者，擁有農業(yè)部認證的精制卵黃抗體生產車間，并持有鴨病毒性肝炎、雞傳染性法氏囊炎、小鵝瘟三種精制抗體的國家二類新獸藥證書，信得科技集團青島研發(fā)中心博士后科研工作站研發(fā)團隊在關于卵黃抗體生產工藝對其使用效果的影響方面進行了持久和廣泛的研究。

抗體(免疫球蛋白，Ig)是機體受到外來抗原物質刺激后，機體免疫系統(tǒng)細胞產生的可以特異性地識別和結合外來抗原并使之失活的一類球蛋白。家禽經特定抗原免疫后，可產生相應的特異性抗體進入血液循環(huán)，當血液流經卵巢時，特異性抗體在卵細胞中逐漸蓄積，并儲存于卵黃中，這種抗體稱為卵黃抗體(Immunoglobulin of yolk，IgY)，它是卵黃中唯一的免疫球蛋白，具有特異性和針對性,無毒副作用。

雞、鴨、鵝等禽類的蛋在營養(yǎng)成分上大致相同，主要由蛋黃、蛋清（即蛋白）和蛋殼構成。鴨蛋每個約重60-75克，其中蛋黃占32%，蛋清占57%，其余11%為蛋殼。其中蛋黃又由如下圖所示的成分所構成：

從圖中可以看出，在治療鴨病毒性肝炎，使用卵黃抗體時，起到關鍵作用的是卵黃中的免疫球蛋白（IgY)，IgY的作用非常廣泛，其中最主要的作用有以下幾種：

v
特定的卵黃抗體能黏附于特定病毒的衣殼上，直接抑制病毒的生長繁殖；

v
可以黏附于細菌的菌毛上，使之不能黏附于粘膜上皮細胞，失去感染能力；

v
能夠促進單核巨噬細胞的吞噬作用（調理作用）；

v
中和細菌、霉菌等毒素的毒性（中和毒素）；

v
與病毒抗原結合使病毒失去感染宿主細胞的能力（中和病毒）。

既然鴨病毒性肝炎卵黃抗體的作用即是蛋黃中免疫球蛋白的作用，那么，有無方法把蛋黃中的免疫球蛋白分離出來呢？蛋黃中所含有的大量脂蛋白及脂肪等物質沒有任何治療作用且體積大，粘稠度高，注射困難且難以吸收，注射后對機體的應激大，易造成過敏反應，是外源性致熱原，加上注射后易造成注射部位局部組織出血、腫脹、壞死，壞死的組織也會導致機體發(fā)熱，而發(fā)熱會造成機體神經調節(jié)、體液調節(jié)等功能的紊亂，從而導致鴨群采食量減少，抵抗力下降，繼發(fā)傳染性漿膜炎、大腸桿菌等疾病。大量的調查還發(fā)現(xiàn)，目前市面上可見的粗制抗體幾乎都是地下作坊生產的“三無”產品，生產環(huán)境及產品質量令人堪憂。這些粗制抗體不僅抗體效價難以保證，而且通常會污染禽呼腸孤病毒、禽淋巴白血病病毒、網狀內皮增生因子、大腸桿菌、沙門氏菌、支原體等外源性致病原。在注射抗體預防或者治療鴨病毒性肝炎時，極有可能造成垂直傳播病原或其他一些細菌、病毒的擴散甚至疾病的爆發(fā)，帶來嚴重的經濟損失。

此外，由于非法造假者往往試圖通過添加大劑量的甲醛、青、鏈霉素等措施來延長其產品的保質期，增加所謂的使用安全性，但結果往往是造成更大的應激和嚴重的藥物殘留。這就是鴨病毒性肝炎粗制抗體的購買者和使用者對粗制抗體的使用效果產生疑問的重要原因之一。

信得科技集團的精制蛋黃抗體采用了物理、化學、生物等多重滅活技術，并結合使用

酸化法、高速離心、超濾等現(xiàn)代生物技術HOF生產工藝
。精制就是將蛋黃中的免疫球蛋白進行分離純化的過程。已知蛋黃是由水溶相（Water soluble fraction, WSF）和水不溶相（Water insoluble fraction, WIF）構成的乳濁液。WIF主要為脂蛋白構成，而蛋黃抗體存在于蛋黃的WSF中。WSF中的脂蛋白類含量甚微，其物理性狀為近乎透明的透明液體。因此蛋黃抗體精制過程即是WSF的分離過程。大量臨床使用案例表明，信得精制蛋黃抗體具有效價穩(wěn)定、效果確實、保存時間長和便于應用的優(yōu)點。同時精制蛋黃抗體不會在注射部位殘留，對胴體品質無任何影響。

下列表格是信得精制蛋黃抗體與市售粗制蛋黃抗體的比較：

信得鴨病毒性肝炎卵黃抗體（肝倍舒）的特點：

1、國家二類新獸藥，GMP認證；

2、保護譜廣、治愈率高：本產品在制備過程中除采用了標準毒株外，還采用了國內各養(yǎng)鴨密集區(qū)的超強毒株及變異株，對鴨病毒性肝炎變異地區(qū)亦有非常好的防治效果，對發(fā)病鴨群的治愈率達95%以上；

3、提純濃縮、抗體效價高：梯密度濃縮技術，精制提純到免疫球蛋白，效價是一般市售產品的4-5倍，達到1：1024-1280；

4、見效快，保護時間長：5-6小時控制病情，降低死亡，恢復精神狀態(tài)，注射一次有效抗體效價能夠維持10天以上；

5、注射劑量小，應激小，無毒副作用：將蛋黃中脂肪、脂蛋白分離去除，其性狀為近乎透明的無色液體，不含任何有害物質和外源污染，安全性高，對機體無任何刺激及毒副作用，對胴體品質無影響；

6、抗體粘稠度低，流動性好，使用時無需解凍，注射方便快捷，只需使用小號針頭，更有利于注射部位皮膚愈合；

7、抗逆性強，疫苗耐熱保護技術及疫苗專用包裝，效價穩(wěn)定，保存時間長：2－8℃條件保存18個月，常溫條件下保存6個月對抗體效價無任何影響。

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