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    標題: 博士論文:高效降解棉酚菌種的選育及棉籽餅粕生物發酵的研究 [打印本頁]

    作者: dbnyuanwu    時間: 2009-3-9 14:50
    標題: 博士論文:高效降解棉酚菌種的選育及棉籽餅粕生物發酵的研究
    內容介紹:摘要 棉籽餅粕富含蛋白質,是很好的植物蛋白飼料資源。但因其含有對動物有 毒的游離棉酚,其利用價值和使用量受到極大限制。為此,人們研究了許多脫 毒方法,如有機溶劑浸提、硫酸亞鐵處理、氫氧化鈣處理以及微生物發酵等方 法。這些方法在棉籽餅粕脫毒方面起到了重要作用,但有機溶劑浸提法存在有 機溶劑殘留問題,對動物有潛在的危害;硫酸亞鐵處理影響飼料品質和降低采 食量;氫氧化鈣處理脫毒效率相對較低。微生物發酵法是一種有發展前景的方 法,該法不但能脫除棉籽餅粕中的棉酚,而且還可以提高棉籽餅粕的蛋白質含 量,發酵底物中存留許多酶類(微生物分泌,如纖維素酶、淀粉酶、蛋白酶和脂 解酶)、維生素、氨基酸以及一些促生長因子,因而受到了廣泛重視。 本課題通過選育高效降解棉酚的菌株,優化發酵工藝參數,探討影響發酵 脫毒效果的因素,考察復合發酵脫毒效果及其影響因素等途徑來研究棉籽餅粕 生物發酵效果。 通過醋酸棉酚無糖查氏培養基和醋酸棉酚麥芽汁培養基平板篩選和培育技 術,并利用棉籽餅生物發酵的方法,選育出一株對棉酚具有較高脫毒率的菌種 熱帶假絲酵母ZD一3(CandidalropicalisZD一3)。熱帶假絲酵母ZD一3細胞呈卵圓 形,大小為3~4X4一5腳,出芽繁殖。用麥芽汁液體培養該菌,菌體沉淀于 管底。平板培養菌落有皺紋,可形成假菌絲。熱帶假絲酵母ZD一3不能在半厭 氧條件下發酵棉子糖以及在好氧條件下同化利用棉子糖,因此在利用該菌進行 棉籽餅發酵脫毒時,應注意可發酵糖類物質(如淀粉)的補充。在液體培養基 中,熱帶假絲酵母ZD一3用于研究的適宜取種時間為12~18h(對數生長期)。 利用熱帶假絲酵母ZD一3對棉籽餅進行固體發酵脫毒,通過對底物游離棉酚 含量的測定,優化其發酵工藝參數。優化試驗結果表明,底物組成適宜比例為棉 籽餅70%、玉米粉20%、小麥鼓10%。棉籽餅發酵脫毒的最佳條件參數為:發酵 時間48h,發酵溫度30℃,菌液接種量5%(v/w),底物水分含量50%,自然pH值 利用熱帶假絲酵母ZD一3對不同因子處理的棉籽餅底物進行生物固體發酵, 然后測定發酵底物中游離棉酚(FG)、蛋白質含量等指標,探討糖源、加熱處 浙江大學博士學位論文2006.6摘要 理、尿素、硫酸亞鐵、碳酸鈉以及礦物質等因素對棉籽餅生物發酵脫毒效果的 影響。試驗結果表明,棉籽餅底物沖加入不同的可發酵糖源,可顯著提高脫毒 效率,其中淀粉效果最好,脫毒率高達91.91%;加熱處理可顯著降低FG含量, 有利于棉籽餅底物的發酵脫毒;但底物中添加尿素,可降低棉籽餅發酵脫毒率, 不利于熱帶假絲酵母ZD一3發酵脫毒;底物中添加硫酸亞鐵、碳酸鈉和復合礦 物質,可顯著提高假絲酵母ZD一3對棉籽餅的發酵脫毒率,脫毒率分別高達 94.70%、93.96%以及96.67%。 棉籽餅底物中分別加入O、0.5%、1%、2%的乙醇胺或氯化膽堿,混合均勻, 然后進行熱處理試驗和微生物發酵試驗。試驗結果表明,棉籽餅底物中加入不 同比例的乙醇胺或氯化膽堿,不利于棉籽餅熱處理脫毒和發酵脫毒。 通過測定發酵底物FG含量、底物蛋白酶活性(中性、堿性和酸性)和底 物菌量的方法研究氯化膽堿、乙醇胺、卵磷脂以及全脂大豆對發酵效果的影響。 試驗結果表明,①在底物熱處理條件下發酵,氯化膽堿、乙醇胺、卵磷脂和全 脂大豆均無促進發酵脫毒作用,除氯化膽堿外,均顯著降低發酵脫毒效率;氯 化膽堿、乙醇胺和卵磷脂可極顯著提高中性蛋白酶活性;氯化膽堿和卵磷脂可 極顯著提高堿性蛋白酶活性;各處理因素均可極顯著提高底物酸性蛋白酶活 性;各處理因素可極顯著提高底物菌體含量,其中氯化膽堿效果最好。②在底 物非熱處理條件下發酵,乙醇胺、卵磷脂和全脂大豆均無促進發酵脫毒作用, 且顯著降低發酵脫毒效率,但氯化膽堿有促進發酵脫毒的趨勢;卵磷脂和全脂 大豆可極顯著提高中性蛋白酶活性;各處理因素可極顯著提高底物堿性蛋白酶 活性,極顯著降低底物酸性蛋白酶活性;氯化膽堿可極顯著提高底物菌量,而 其它因素處理的底物菌量顯著降低。③研究發現氯化膽堿對棉籽餅底物發酵脫 毒和底物營養價值有重要的意義,其底物蛋白酶活性高、菌量多。在底物非熱 處理條件下發酵,低濃度氯化膽堿具有促進發酵脫毒的作用。 利用熱帶假絲酵母ZD一3和黑曲霉ZD一8對棉籽餅進行單菌及復合菌種發 酵,然后測定發酵底物中游離棉酚(FG)、粗纖維(CF)、粗脂肪(EE)、氨基 酸含量,體外法測定飼料蛋白質氨基酸消失率,用環境掃描電鏡拍攝底物發酵 后的顯微形態結構變化等研究復合發酵效果。試驗結果表明,復合發酵可極顯 著地降低棉籽餅底物游離棉酚含量,脫毒率為91.64%;棉籽餅底物粗蛋白、總

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