飼料中色氨酸含量的測定
數據來源：畜牧人文獻數據 上傳資料
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飼料中色氨酸含量的測定
數據來源：畜牧人文獻數據 上傳資料
| 【標準名稱】 飼料中色氨酸測定方法 分光光度法 | |||||||||||||||||||||||||||
| 【標準號】 GB/T 15400-94 | |||||||||||||||||||||||||||
| 【標準文件】 飼料中色氨酸測定方法 分光光度法 （ 畜禽飼料與添加劑 ） 1 主題內容與適用范圍 本標準規定了測定飼料中色氨酸的原理和方法。 本標準適用于配合飼料、混合飼料、濃縮飼料和單一飼料。 2 引用標準 GB 6433 飼料粗脂肪測定方法 3 原理 飼料中蛋白質經堿水解后，降解成多肽和游離的氨基酸，在酸性介質中，氧化劑存在下，色氨酸吲哚環與對二甲氨基苯甲醛反應生成藍色化合物，在一定范圍內顏色深淺與色氨酸含量成正比。 4 試劑 除注明者外均為分析純。水為蒸餾水。 4.1 硫酸（GB 625）溶液、 c （1/2H 2 SO 4 ）＝21.2mol/L 量取 589mL硫酸徐徐加入約350mL水中，冷卻后用稀釋至1L。 4.2 1％對二甲氨基苯甲醛溶液： 1.0g對二甲氨基苯甲醛溶于21.2mol/L硫酸（4.1）中并定容100mL。 4.3 0.2％亞硝酸鈉（GB 633）溶液（ m / V ）。 4.4 10％氫氧化鉀（GB 2306）溶液（ m / V ）。 4.5 L-色氨酸，色譜純。 4.6 L-色氨酸標準溶液： 準確稱取 25.0mgL-色氨酸于小燒杯中，加少量0.1mol/L氫氧化鉀溶液使之溶解，定量地轉移到250mL棕色容量瓶中，用水定容，濃度為100 μ g/mL。 注：本標準溶液 4℃冰箱中保存，一個月內使用，濃度不變。 5 儀器、設備 5.1 分析天平：感量0.1mg。 5.2 分光光度計。 5.3 離心機：轉速4000r/min。 5.4 實驗室用粉碎機。 5.5 培養箱。 5.6 容量瓶：25mL、50mL、250mL。 5.7 10mL具塞試管。 5.8 刻度吸管：0.5mL、2mL、5mL、25mL。 6 試樣的制備 6.1 選取有代表性的試樣，按四分法縮分至200g，粉碎，全部通過0.25mm孔徑篩（60目）。 6.2 按GB 6433 脫脂并測定脂肪含量。脫脂樣品風干后，混勻，裝入密封容器內備用。 7 分析步驟 7.1 工作曲線的繪制 7.1.1 吸取色氨酸濃度為100 μ g/mL的標準溶液（4.6）5.00、7.50、10.00、12.50、15.00、17.50mL分別置于25mL棕色容量瓶中用水定容，搖勻。溶液濃度分別為20、30、40、50、60、70 μ g/mL。 7.1.2 吸取各濃度溶液（7.1.1）1mL，分置具塞試管（5.7）中，空白管加1mL水向每支試管內加入氫氧化鉀溶液（4.4）1mL，混勻，將試管放入冷水盆中，加5mL對二甲氨基苯甲醛溶液（4.2），從冷水盆中取出試管，搖勻，在室溫（20～30℃，下同）放置30min。 7.1.3 向上述每支試管內加0.2mL亞硝酸鈉溶液（4.3），搖勻，室溫放置25min。 7.1.4 以空白管調零，在590nm波長下，以1cm光徑測定各溶液吸光度值。 7.1.5 以色氨酸濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制工作曲線，或列出回歸方程式。 7.2 樣品測定 7.2.1 稱樣：按附表A建議的稱樣量稱取脫脂試樣兩份，精確至0.1mg。 7.2.2 水解：將試樣置于50mL容量瓶（5.6）中，在輕輕振搖中緩慢加入25mL氫氧化鉀溶液（4.4），使試樣濕潤且不粘壁，置于40±1℃培養箱（3.5）中水解16～18h。 7.2.3 離心：取出水解液冷卻至室溫后，用水定容，搖勻，取部分水解液以4000r/min轉速離心15min。 7.2.4 顯色：取2mL上清液置具塞試管（5.7）中，并將試管放入冷水盆中，加入5mL對二甲氨基苯甲醛溶液（4.2），搖勻。每個試樣另取2mL上清液于具塞試管（5.7）中，加5mL硫酸溶液（4.1）作為樣品空白，搖勻，室溫放置30min。然后向每支試管內加入0.2mL亞硝酸鈉溶液（4.3），搖勻，室溫放置25min。 7.2.5 比色：以樣品空白調零，在590nm波長處1cm光徑測定樣品溶液的吸光度值。 8 分析結果的表述 8.1 計算公式
兩個平行樣品的測定結果用算術平均值表示，保留二位小數。 試樣脂肪含量小于 4％時，式（1）和（2）所得結果在允許偏差之內。 8.3 重復性 兩個平行樣品測定值的相對偏差，當色氨酸含量小于 0.1％時，不大于4％；0.10％～0.50％時，不大于3％;大于0.50％時，不大于2％。 附 錄 A 稱 樣 量 （參考件） 根據樣品蛋白質、色氨酸含量確定稱樣量，經試驗研究建議不同飼料稱樣量如下：
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