畜牧人
標題: 三聚氰胺的檢測方法！ [打印本頁]
作者: 韓新華 時間: 2008-10-2 04:53
標題: 三聚氰胺的檢測方法！
請大家看看這幾種方法對大家是否有用？
作者: 韓新華 時間: 2008-10-2 04:56
三聚氰胺簡稱三胺, 別名蜜胺、氰尿酰胺, 分子式:C3N6H6, 分子量: 126.12, 是一種重要的氮雜環有機化工原料。物理性能: 白色結晶粉末, 無味, LD50( 半數致死量) :4550 mg/kg(小鼠經口); 3000 mg/kg(大鼠經口), 相對密度:1570 kg/m3。熔點: 在常壓下, 354℃分解。升華溫度:300℃。溶解性: 能溶于甲醇、甲醛、乙酸、熱乙二醇、甘油、吡啶; 微溶于水、乙醇; 不溶于乙醚、苯和四氯化碳。水溶液呈弱堿性。化學性能: 三聚氰胺顯弱堿性, 能夠與各種酸反應生成三聚氰胺鹽。在強酸或強堿液中, 三聚氰胺發生水解, 胺基逐步被羥基取代, 生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸。三聚氰胺與醛類反應生成加成化合物。其中三聚氰胺與甲醛水溶液的反應是最重要的反應。
很多飼料廠控制飼料原料時, 基于條件所限, 常用凱氏定氮方法測定粗蛋白的含量, 因為凱氏定氮只能測出含氮量而無法測出氮的來源, 加上蛋白質原料價格比常規的谷物原料要高很多, 為謀取不當得利和彌補飼料原料中蛋白含量低的問題, 不法商人常常加入非蛋白原料, 如工業尿素、二脲等非蛋白氮而冒充粗蛋白質。對于加入尿素以及尿素類成品可以通過檢測氨氮的方法檢測出來, 而三聚氰胺不溶解在水里, 抗氨氮測定, 所以一般的飼料分析化驗部門也很難分析出來。有時在化驗一些蛋白質原料時, 蛋白質含量高, 而氨基酸含量低, 也可能是加入三聚氰胺。另外, 三聚氰胺含氮量為66.6%, 折合成粗蛋白含量為416.27%, 摻入少量就可以迅速提高蛋白含量。加上三聚氰胺為白色粉末, 易被染色, 很容易混入原料中而不被發現。三聚氰胺通常被摻入蛋白飼料中, 如大豆蛋白粉、魚粉、肉骨粉、玉米蛋白粉以及餅粕類原料等。三聚氰胺是一種有機化工產品, 不是國家許可的飼料和食品添加劑, 加入飼料原料中對人和動物產生的危害也在進一步研究中。
工業上測定三聚氰胺的純度通常采用苦味酸法和升華法。苦味酸法方法原理: 將水加入試樣, 加熱溶解后, 加人苦味酸溶液, 稱量所生成的苦味酸三聚氰胺沉淀的質量, 即測得三聚氰胺純度含量。分析步驟: 稱取試樣, 置于500 ml 錐形瓶中, 同時加入水, 加熱溶解; 冷卻后, 加入酚酞指示液3 滴, 若顯色, 加入硫酸溶液, 直至溶液顏色消失, 若有不溶物, 需過濾, 水洗; 把濾液和洗液合并, 移入500 ml 容量瓶中, 加水至刻度, 仔細振搖混合后, 準確吸取100 ml 置于500 ml 燒杯里; 將此溶液加熱至80℃, 另加入已加熱至80℃的100 ml 苦味酸溶液, 冷卻至室溫后, 保持在15℃以下約8 小時; 用已恒重的玻砂過濾器過濾, 之后,先用約100 ml 苦味酸三聚氰胺的飽和溶液洗滌, 再用水洗; 烘干玻砂過濾器, 置于干燥器中冷卻后, 稱量求得沉淀物質量。升華法測定原理: 在升華裝置中將試樣在負壓下進行加熱, 讓三聚氰胺完全升華后, 稱其殘渣量, 即測得三聚氰胺純度。分析步驟: 稱取試樣, 置于預先干燥了的且已知質量的試樣容器里; 將試樣容器置入減壓升華裝置內,待完全密閉后, 開啟真空裝置緩緩吸引, 并調節裝置內的
溫度, 經2 小時升華結束; 取出試樣容器, 冷至室溫后, 稱量試樣容器的質量。上述兩種測定方法準確度均較高, 但操作繁瑣, 分析時間太長,有人推薦采用電位滴定法。具體測定方法, 首先測定三聚氰胺溶液中總固體的含量, 稱取樣品于200 ml燒杯中, 加入100 ml 蒸餾水, 放于石棉網的電爐上加熱,在沸騰的情況下攪拌溶液, 使試樣完全溶解。在電磁攪拌狀態下, 用硫酸標準溶液滴定熱溶液至pH 值為5 左右。流水冷卻溶液至室溫, 滴定, 每次準確加入0.1 ml 硫酸標液,并記下相應的pH 值, 直至pH 值約為3。計算出等當量點時消耗硫酸標液的體積。結果計算按公式Me=S×6.307×V×F /m ( 其中式中:Me 為溶液中三聚氰胺的含量, %; S 為溶液中總固體的含量, %; V 為等當量點時消耗硫酸標液的體積, ml; F 為0.5 mol /L 硫酸標液的校正系數; m 為滴定時所標取總固體的質量; 6.307 為換算系數) 。
作者: 韓新華 時間: 2008-10-2 05:00
標題: 行業標準征集稿（三聚氰胺檢測）
飼料中三聚氰胺的測定
1 范圍
本標準規定了用高效液相色譜法（HPLC）和氣相色譜質譜法（GCMS）測定飼料中三聚氰胺的方法。高效液相色譜法為篩選法，氣相色譜質譜法為確證法。
本標準適用于配合飼料，預混料、濃縮飼料、飼料添加劑、植物性蛋白粉、寵物飼料中三聚氰胺的測定，方法最低定量限高效液相色譜法和氣相色譜質譜法分別為2.0mg/kg和0.05mg/kg，高效液相色譜的最低檢測濃度分別為0.5mg/kg。
2 規范性引用文件
下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。
第一法 高效液相色譜法
3 原理
試樣中的三聚氰胺用1％三氯乙酸提取，離心后取部分提取液，用陽離子交換柱凈化，洗脫物用具有二極管陣列檢測器的高效液相色譜儀進行定量。
4 試劑與材料
除非另有規定，僅使用分析純試劑。水為蒸餾水，色譜用水符合GB/T 6682一級用水的規定。
4.1 甲醇：色譜純。
4.2 乙睛：色譜純。
4.3 氨水。
4.3 陽離子交換柱(SPE柱)：60mg，3mL或150mg，6mL。
4.4 1％三氯乙酸：稱取10g三氯乙酸溶解于1000mL水中。
4.5 5％氨化甲醇：量取5mL氨水，溶解于100mL甲醇中。
4.6乙酸鉛溶液（ρ（PbAc2）=22g/L）：取22g乙酸鉛用約300mL水溶解后定容至1L。
4.7 濾膜：0.45m，有機相
4.8 三聚氰胺標準品（﹥99.0％）
4.9 標準儲備液（1mg/mL）：稱取100mg（精確到0.1mg）的標準品，用甲醇/水（2:8，V:V）溶解并定容于100mL容量瓶中。
4.10 標準工作液：標準工作液按照需要逐級稀釋配制。
5 儀器與設備
5.1 高效液相色譜儀，配有二極管陣列檢測器。
5.2 離心機：10000rpm
5.3 渦旋混合器
5.4 氮吹儀
5.5 固相萃取裝置
5.6 高速勻質器
5.7 索式提取器
6 測定步驟
6.1 提取
6.1.1 植物蛋白和飼料中三聚氰胺的提取
稱取5.0g樣品，準確加入48ml1％的三氯乙酸溶液，加入2mL飽和醋酸鉛溶液。搖勻，超聲提取20min。取提取液約30mL轉入離心管，在10000rpm離心機上離心5min。
6.1.2 寵物飼料中三聚氰胺的提取
稱取5.0g樣品，在索式提取器中用乙醚回流6h去除脂肪。脫脂殘渣準確加入48ml1％的三氯乙酸溶液，加入2mL飽和醋酸鉛溶液。搖勻，超聲提取20min。取提取液約30mL轉入離心管，在10000rpm離心機上離心5min。
6.2 凈化
MCX柱活化和上樣：分別用3ml甲醇，3ml水活化MCX柱，準確移取10mL離心液分次上柱。再用3ml水和3ml甲醇洗滌MCX柱，抽近干后用5％氨化甲醇溶液（4.5）3ml洗脫。洗脫液于氮吹儀上50℃氮吹至干，用2+8甲醇水定容，過0.45m濾膜，濾液用于液相色譜測定。
6.3 測定
6.3.1液相色譜條件
色譜柱：C8柱，1504.6mm(i.d)，5m；
柱溫：室溫
流動相：10+90（乙腈：10mM庚烷磺酸鈉，10mM檸檬酸緩沖液）
檢測波長：240nm
進樣量：20L
根據試樣中被測物的含量情況，選取響應值適宜的標準工作液進行色譜分析，按照保留時間和二極管陣列的紫外光譜進行定性，標準工作液應有五個濃度水平。標準工作液和待測樣液中三聚氰胺的響應值應在儀器線性響應范圍內。
6.4 結果計算和表述
按照下式計算試樣中三聚氰胺的含量：
式中：
W－試樣中三聚氰胺的含量，單位為毫克每公斤（mg/kg）；
V－樣品最終定容體積，單位為克（g）；
c－由標準曲線而得的樣液中三聚氰胺的含量，單位為微克每升（g/L）；
m－試樣量，單位為克（g）。
n — 稀釋倍數。
6.5 結果表示
平行測定結果用算術平均值表示，結果保留三位有效數字。
7重復性
在同一實驗室由同一操作人員使用同一儀器完成的兩個平行測定的相對偏差不大于10%
氣相色譜－質譜法（確證法）
8 方法提要
試樣中的三聚氰胺用1％三氯乙酸提取，用陽離子交換柱凈化，用BSTFA衍生化，用氣相色譜-質譜進行定性和定量分析。
9 試劑和材料
衍生化試劑：N,O-雙三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）
其他同5
10 儀器和設備
氣相色譜-質譜，其它同6
11 分析步驟
前處理同6.1和6.2
11.1 衍生化
將6.2的凈化液吹干，加入200L的吡啶和200L的BSTFA，混勻，在70℃衍生30min。同時用三聚氰胺標準系列做同步衍生。
測定
11.2 氣相色譜－質譜條件
柱子：DB-5MS柱
載氣：He 流速: 1.3 ml/min 平均線性速度: 35 cm/sec 壓力: 17.5 psi (initial) 模式: 恒流
進樣：不分流或分流進樣 (1:20)，進樣體積為1µl，進樣溫度: 250ºC
升溫程序：起始溫度為75ºC，持續1.0 min，以30ºC/min升溫至300ºC，保持2.0 min。傳輸線溫度為280 ºC。
運行時間: 10.5 min
質譜條件：質量范圍: 40-450 amu
掃描模式：全掃描 (Electron Ionization)
溶劑延遲: 4.2 min (splitless); 3.8 min (split)
四極桿: 150ºC
離子源: 230ºC
監測離子：特征離子 171，99，73；分子離子：327，342
11.3 定性定量方法
定性方法：樣品與標準品保留時間的相對標準偏差不大于0.5%。特征離子基峰百分數與標準品相差不大于20％。
定量方法：選擇離子監測（SIM）法計算峰面積，單點或多點校準法定量。
12 結果結算和表述
按照下式計算試樣中三聚氰胺的含量：
式中：
W－試樣中三聚氰胺的含量，單位為毫克每公斤（mg/kg）；
V－樣品最終定容體積，單位為克（g）；
c－由標準曲線而得的樣液中三聚氰胺的含量，單位為微克每升（g/L）；
m－試樣量，單位為克（g）。
平行測定結果用算術平均值表示，結果保留三位有效數字。
13 允許差
取平行測定結果的算術平均值為測定結果，兩個平行測定的相對偏差不大于20％。
作者: songping 時間: 2008-10-2 10:37
國家也在征集好的方法，關鍵是實用，易操作，氣相液相一般的做不來的
作者: wangliguo429 時間: 2008-10-4 17:26
正需要，謝樓主提供:xuehu:
作者: wfcllyb 時間: 2008-10-4 18:18
方法不錯，但樓主是不是在第三樓將計算公式給忘了！
作者: 毅石 時間: 2008-10-5 12:34
查過一些文獻，大都用氣相色譜。一般的飼料企業做不到的！
作者: laomo7909 時間: 2008-10-5 12:53
我覺得現在我們已經不是研究怎么測三聚氰胺了，最需要研究的是怎么改進測蛋白的方法。在這個摻假橫飛的年代，利用傳統的方法測粗蛋白還能代表什么？只能帶來對人們生活的傷害，國家不顧勞動人們的死活，一生令下，奶牛只能把白白的牛奶給倒掉，只能是讓世界人民看中國人的消化，只能是讓“made in china”成為假貨的代名詞。可悲啊。
作者: xnkiller 時間: 2008-10-5 13:14
就是這個檢測方法，但是這個方法的成本非常高，重要的是原料控制和和科學合理的管理
作者: 新新寶貝 時間: 2008-10-5 14:12
這樣的話,我們只能用一些常規的大眾原料,那些當地的一些好的雜粕等原料不敢用就真的是可惜
作者: 韓新華 時間: 2008-10-5 22:42
標題: 回復 12樓 xnkiller 的帖子
現在有這種檢測設備，最便宜的3萬多。:huahua: :huahua: :huahua:
作者: shyjkl 時間: 2008-10-6 16:12
這是定量測定,請問樓主有沒有定性測定啊?
作者: 實在是高 時間: 2008-10-9 15:35
有經驗的朋友能不能把定性檢驗的方法說下呀
作者: 楊青 時間: 2008-10-9 15:54
哈哈哈,還是提高飼料企業的準入門檻就搞定了呀,要求所有的飼料企業必須配備氣相或液相色普儀,就象分光光度計一樣,我想這些問題就都能搞定了
作者: 實在是高 時間: 2008-10-9 16:17
小企業想活下來已經不如意了，其實最好還是用最簡單的方法做最有用的實驗，我們只是想看看我們原料和成品料有沒有三聚氰胺，趕在畜牧局前面知道真相．送建一個就３００塊，肉疼呀:kelian:
作者: 萌萌1108 時間: 2008-10-10 17:05
說的也是，飼料廠本身利潤就很薄，那么貴的設備利用率又低，單純測一個三聚氰胺感覺有點不值。但送檢又時間長價格也不低，矛盾啊
作者: gsj 時間: 2008-10-10 17:46
確實是這樣啊，摻假厲害啊
作者: 萌萌1108 時間: 2008-10-18 14:42
請教一下樓主，檢測中要用到氮吹儀的，買了氮吹儀了，是不是還得配一個氮氣罐啊
作者: szhilei 時間: 2008-10-18 14:54
原帖由 韓新華 于 2008-10-2 04:56 發表 
三聚氰胺的檢測方法（山東六和集團）1 三聚氰胺的性質
三聚氰胺簡稱三胺, 別名蜜胺、氰尿酰胺, 分子式:C3N6H6, 分子量: 126.12, 是一種重要的氮雜環有機化工原料。物理性能: 白色結晶粉末, 無味, LD50( 半數致死量
山東省畜牧獸醫局印制的三聚氰胺小知識手冊里面全有的，很詳細，山東的到當地畜牧獸醫部門就應該可以領一本的！
作者: baochengyun 時間: 2008-10-20 07:30
我們集團在發生三聚氰胺事件以前就一直在原料檢驗中注意了，特別是顯微鏡檢驗，我們已經有兩種方法檢驗三聚氰胺 方便實用
作者: piaoyi 時間: 2008-10-20 07:58
我想問一下，用顯微鏡能觀察到嗎？我以前用顯微鏡怎么看不到啊，
作者: lzq82 時間: 2008-10-20 09:16
標題: 回復 23樓 baochengyun 的帖子
能不能把你的這個簡便方法讓大家共享一下！
作者: 實在是高 時間: 2008-10-20 14:31
對呀，２３樓的把你的方法說下，我們很想學習一下
作者: 柳粒橙 時間: 2008-10-20 15:49
是啊，有這種定性方法或者顯微鏡方法鑒別對于飼料廠來說最實用了，能否大家說的明白些呢？我也想學習下。
作者: falconqj 時間: 2008-10-20 22:43
學習，這么多學問值得學習
作者: 三劍 時間: 2008-10-20 22:57
標題: 好
很好，非常好，很好
作者: yuanfang 時間: 2008-10-21 10:27
今天三聚氰胺，明天指不定出啥東西了，現在只有測氨基酸含量了，但成本又高，難道對產假就無可奈何了？人真的是太聰明了，假貨滿天飛。害人害己！！！
作者: 實在是高 時間: 2008-10-21 11:48
我都稀罕了國人的聰明怎么全都用到這上面了
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