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植物血凝素Phytohaemagglutinin

植物血凝素(Phytohaemagglutinin)是一種有絲分裂原，主要用于激活免疫細胞—淋巴細胞。是一種干擾素誘導劑，不僅可以刺激機體產生白介素-2和干擾素；還可以刺激機體產生非特異性抗體。由于其較難提純，且成本極高，所以一直以來僅在實驗室中作為刺激淋巴細胞增殖的試劑。

植物血凝素在動物疾病防止上的應用，主要進行以下實驗：

1．利用雞的白細胞脾細胞雞胚成纖維細胞以有機鍺（Ce—123）新城疫弱毒株（NDV-F）植物血凝素（PHA）聚肌胞（POLYI:C）為誘生劑，對外源性干擾素（IFN）誘生條件如誘生劑量誘生時間及培養條件進行了比較分析和探討，結果發現以Ce—123誘生IFN的能力為最強，其他依次為：PHA NDV-F POLYI:C；且雞脾細胞和雞白細胞產生的IFN效價高于雞胚成纖維細胞；并且最佳誘生劑量依次為：Ce—123為70微克/毫升；雞NDV-F為128HAU/毫升；POLYI:C為60微克/毫升；PHA為20毫克/毫升。該研究表明，植物血凝素在機體內刺激機體產生干擾素的能力是聚肌胞的30倍，所產生的作用是是直接服用干擾素的300倍，所以服用1mg植物血凝素相當于服用30mg的聚肌胞和直接服用300mg干擾素。

2．PHA對家禽的新城疫、傳染性法氏囊病、傳染性支氣管炎、傳染性喉氣管炎、腦脊髓炎、流感等疾病的預防及治療效果。結果表明PHA對下列病毒感染的保護率分別為新城疫77。5%、傳染性法氏囊病92。5%、傳染性支氣管炎85%、傳染性喉氣管炎77。5%、腦脊髓炎90%、流感80%。

1．PHA刺激T細胞增殖分化產生大量效應T細胞和細胞毒T細胞；效應T細胞分泌產生大量細胞因子（如干擾素等）殺傷病毒；細胞毒T細胞可直接殺傷病毒。

2..PHA同時可刺激B細胞轉化為漿母細胞然后增殖分化為漿細胞，漿細胞產生大量的非特異性抗體來中和病毒。

植物血凝素對雞常見病毒病的療效研究

為了驗證植物血凝素對雞新城疫、傳染性法氏囊病、雞腎型傳支等6種病毒病的預防效果，指導臨床合理用藥，特進行了本實驗。

1．1藥物植物血凝素，由生化試劑公司提供。

1．2實驗動物及分組 1日齡肉雞520只，購自南京邁本橋雞廠，用溫控育雛籠正常飼養，從21日齡開始給藥，至28日齡用于實驗。隨即分組3組，每組40只，處理祥見表一

表一實驗雞感染與用藥

不用藥，不感染

不用藥，28日齡感染

飲水，連用7日，28日齡感染

1．3攻毒用毒株NDV強毒，IBDV強毒，腎型IBV強毒，ILTV強毒,AEV強毒，HAV強毒，南京農業大學動物醫學院預防醫學系傳染病組饋贈。

1.4人工發病參考常維山等方法，即種毒經37℃水浴融化，用滅菌生理鹽水加雙抗20倍稀釋后，4℃冰箱作用30分鐘，按每胚0。2ml接種10日齡雞胚，37℃孵育，棄取24h內死亡雞胚，接毒后36h將雞胚放入4℃冰箱過夜，無菌收集尿囊液。除健康對照組外，其余各組進行人工感染各種毒株強毒，感染劑量1ml含毒尿囊液，滴鼻或點眼0。5ml，肌肉注射0。5ml。同時雞舍斷電降低舍溫，適當減少飲水供給以誘使發病。

1．5預防實驗 28天后按表一進行感染，實驗期14天，每天定時觀察各組雞的采食、飲水、精神狀況、臨床癥狀，記錄死亡情況，并對病死雞進行尸體剖檢。

1．6療效評價指標

1．6．1 死亡率：具有各種傳染病的各種典型癥狀及病變的死亡雞占該實驗組雞的百分比。

1．6．2治愈率：經用藥治療后，存活病雞臨床癥狀完全消失的占該實驗組的百分比。

1．6．3數據統計處理：用常規統計學方法（X2檢驗）對各組死亡率，治愈率進行顯著性檢驗。

實驗期各用藥組存活雞的臨床癥狀逐漸減輕消失，精神、采食、飲水逐漸恢復正常；用藥組死亡率明顯低于感染對照組，剖檢可見同一時間死亡的病雞比感染對照組病變輕。各組死亡率、治愈率，見表二。

表二PHA的預防結果

實驗結束時有癥狀雞數（只）

PHA主要通過誘導干擾素產生，提高機體免疫力，達到預防疾病的效果。從本實驗結果看出，PHA對家禽雞新城疫、傳染性法氏囊病、傳染性傳支氣管炎、傳染性喉氣管炎、腦脊髓炎、流感等疾病的預防效果明顯，治愈率分別為雞新城疫77．5%、傳染性法氏囊病92．5%、傳染性傳支氣管炎85%、傳染性喉氣管炎72．5%、腦脊髓炎90%、流感80%。

四種誘生劑誘生干擾素實驗

為了比較有機鍺（Ce—123）新城疫弱毒株（NDV-F）植物血凝素（PHA）聚肌胞（POLYI:C）四種誘生劑對雞白細胞、脾細胞、雞胚成纖維細胞的誘生干擾素作用，本實驗進行了此四種誘生劑的體外誘生干擾素的能力研究，為臨床使用提供一定的依據。

新城疫弱毒株（NDV-F），水泡性口炎病毒（VSV），長春凱旋制藥廠提供。雞白細胞、脾細胞、雞胚成纖維細胞均由南京農業大學動物醫學院微生物教研室提供。有機鍺（Ce—123）植物血凝素（PHA）聚肌胞（POLYI:C）由生化試劑公司提供。細胞培養基DMEM，干粉培養基均為美國CibcoBRL公司產品，小牛血清為杭州四季清生物公司產品。

1．2．1雞白細胞、脾細胞、雞胚成纖維細胞干擾素的誘導。參照Carter等人和鄭茂林報道方法，設立4個比較試驗。

1.2.1.1誘生時間的研究

在制好的雞胚成纖維細胞懸液中，加入Ce—123（70ug/ml），NDV-F（128HAU/ml），PHA（20ug/ml），POLYI:C（60ug/ml）37℃靜置培養，分別在培養12、18、24、30、36h收獲細胞培養的上清液，每個時間組3瓶，測定IFN效價后取平均值。

1.2.1.2培養溫度對誘生作用的影響

在制好的雞胚成纖維細胞懸液中，加入Ce—123（70ug/ml），NDV-F（128HAU/ml），PHA（20ug/ml），POLYI:C（60ug/ml），分別在30℃和37℃靜置培養，培養24h收獲細胞培養的上清液，每個溫度組3瓶，測定IFN效價后取平均值。

1．2．1．3誘生劑添加量的比較

有機鍺（Ce—123）設4個劑量組：10、40、70、100ug/ml新城疫弱毒株（NDV-F）設4個劑量組：64、128、256、512HAU/ml植物血凝素（PHA）設4個劑量組：10、20、30、40ug/ml聚肌胞（POLYI:C）設4個劑量組：20、40、60、80ug/ml收獲上清液，每個劑量組3瓶，測定IFN效價后取平均值。

1.2.1.4不同細胞、不同IFN誘生劑在靜置培養條件下產生IFN的比較研究。

以雞白細胞、脾細胞、雞胚成纖維細胞作為生產IFN的細胞，分別加入Ce—123（70ug/ml），NDV-F（128HAU/ml），PHA（20ug/ml），POLYI:C（60ug/ml）作干擾素誘生劑，37℃靜置培養24h。

1．2．2誘生干擾素效價測定實驗。

采用細胞病變抑制法測定IFN效價。以VSV作為被干擾病毒，用雞胚成纖維細胞作為檢測系統，能抑制50%細胞病變的最高稀釋度為一個干擾素活性單位。以

Log2CPEI50/ml或國際單位/毫升（U/ml）.

2．1誘生時間的研究結果

四種誘生劑培養不同時間誘生IFN的結果見表三。

由表三可以看出：Ce—123，NDV-F和PHA的誘生IFN峰值在24h，而POLYI:C的峰值在18h，因此Ce—123，NDV-F和PHA的誘生IFN的收獲時間以24h為宜，而POLYI:C的收獲時間以18h最佳。

表三四種誘生劑培養不同時間誘生IFN效價（log2U/ml）

2.2培養溫度對誘生作用的結果

兩種不同培養溫度對對誘生作用的影響結果見表四。

由表四可以看出，37℃時四種誘生劑的誘生能力好于30℃的誘生能力，因此本實驗選用37℃作為四種誘生劑的培養溫度。

2．3誘生劑最佳誘生劑量的研究

誘生劑最佳誘生劑量的結果見表五。

又表五可以看出，Ce—123隨著添加量的增加，其誘生能力增強，中等劑量與高劑量相比，略低，比低劑量和最低劑量高，差異顯著；NDV-F和PHA在低劑量時誘生效果最好，高劑量反而下降；POLYI:C在中等劑量誘生效果最佳。因此，Ce—132 NDV-F PHA 和POLYI:C的最佳誘生劑量分別為70ug/ml,128HAU/ml,20ug/ml,60ug/ml.

表四四種誘生劑不同培養溫度誘生IFN效價（log2U/ml）

表五四種誘生劑不同劑量誘生IFN效價（log2U/ml）

2．4不同細胞、不同IFN誘生劑在靜置培養條件下生產IFN的比較研究

不同細胞、不同IFN誘生劑在靜置培養條件下生產IFN的比較結果見表六。

由表六可以看出，以Ce—132為誘生IFN的能力最強，其次是PHA，POLYI:C的效果最差。此四種誘生劑，經統計學分析，誘生能力差異顯著（P<0）。三種細胞產生IFN的滴度差異顯著（P<0），脾細胞與白細胞相當，差異不顯著（P>0），比雞胚成纖維細胞效果好，差異顯著（P<0）。

表六不同細胞、不同IFN誘生劑在靜置培養條件下生產IFN的效價（log2U/ml）

由上述結果可以看出，Ce—132誘生IFN的能力最強，其他依次是PHA，NDV-F，POLYI:C，且雞脾細胞和雞白細胞產生的IFN的效價高于雞胚成纖維細胞。Ce—132 NDV-F PHA 和POLYI:C的最佳誘生劑量分別為70ug/ml,128HAU/ml,20ug/ml,60ug/ml.。

通過PHA 和POLYI:C的比較可以看出，植物血凝素在機體內刺激機體產生干擾素的能力約為聚肌胞的30倍，所產生的作用是直接服用干擾素的300倍，所以服用1mg植物血凝素相當于服用30mg的聚肌胞和直接服用300mg干擾素。

性狀：白色疏松團塊，遇水可快速溶解。

作用與用途：廣譜抗病毒，用于畜禽各種病毒性疾病的預防和治療。

肌注用適量生理鹽水稀釋可用于雛雞2000只成雞1000只

豬牛羊用5ml生理鹽水稀釋每千克體重0。02ml

隔日1次連用2次

混飲藥量加倍溶解于飲水中每日1次連用3次

包裝規格：10只/盒×12盒/箱

貯藏：常溫，遮光，干燥處保存植物血凝素（phytohaemagglutinin,PHA），是一種有絲分裂原，主要用于激活免疫細胞—淋巴細胞。是利用國際先進的超低溫冷凍技術從紅蕓豆中提取的一種物質，由于其較難提純，且成本極高，所以一直以來僅在實驗室中作為刺激巴細胞增殖的試劑。
　　一、主要成分
　　植物血凝素的主要成分為植物多肽，是一種低聚糖(由D-甘露糖、氨基酸葡萄糖酸衍生物構成)與蛋白質的復合物。
　　二、藥理作用
　　1．植物血凝素為廣譜抗病毒藥，可刺激T淋巴細胞增殖分化產生大量效應T細胞和細胞毒T細胞，效應T細胞分泌產生大量細胞因子（如干擾素等）殺傷病毒，細胞毒T細胞可直接殺傷病毒。
　　2．植物血凝素可同時刺激B細胞轉化為漿母細胞后增殖分化為漿細胞，漿細胞產生大量非特異性抗體來中和病毒。
　　3．可增加機體免疫功能，提高骨髓造血機能，促進機體白細胞及多核白細胞明顯增加；提高機體細胞誘生干擾素，增加機體免疫力，促進抗體形成，增強機體對病原微生物的吞噬作用。
　　4．植物血凝素與黃芪多糖、左旋咪唑、阿糖腺苷配伍，有明顯的增效作用；與部分抗生素等配伍具有相加作用。
　　5．植物血凝素肌肉注射后約5~15分鐘血藥濃度達高峰，口服后約1小時后血藥濃度達高峰，代謝產物主要從尿液排出。
　　三、特點
　　1．使用方便、廣泛，可以與許多藥物同時使用，據有協同作用或相加作用。在粉、散劑中添加植物血凝素，具有明顯提高原有產品療效的作用，同時不干擾源產品的檢測，且無種屬特異性，可廣泛應用于家禽、豬、牛等動物。
　　2．使用安全，首先使用植物血凝素后不影響機體抗體水平，可用于預防肉仔雞后期常發的病毒性疾病，避免了由于加強免疫引起的抗體水平過高、疫苗應激反應、藥殘嚴重，影響家禽產品出口。其次植物血凝素抗病毒譜廣，毒性小、安全范圍大。
　　3．可以與疫苗同時使用，能起到彌補免疫空白期、緩減疫苗應激反應、增強免疫效果的作用。
　　4．植物血凝素經特殊加工可口服給藥，不受消化酶和胃酸的破壞，可常溫保存兩年（液體保存時一般6個月左右就開始出現渾濁現象，降低療效）。避免了一般干擾素質量不穩定、應用時口服吸收差易被破壞，必須低溫保存的缺陷。
　　四、作用
　　1．主要用于激活免疫細胞——淋巴細胞，是一種干擾素誘導劑，不僅可以刺激機體產生白介素-2和干擾素，還可以刺激機體產生非特異性抗體。
　　2．廣譜抗病毒藥，可用于防制家禽、家畜病毒性疾病，如雞的傳支、傳喉、新城疫、傳染性法氏囊病、雞痘；鴨瘟、鴨病毒性肝炎；豬圓環病毒病、藍耳病、豬傳染性胃腸炎、豬病毒性腹瀉、豬繁殖與呼吸綜合征、非典型豬瘟；犬、水貂的犬瘟熱、犬細小病毒等病毒性疾病。
　　3．植物血凝素可作為動物免疫增強劑進行治療、輔助用藥或用于免疫功能受損引起的疾病，用來增強動物機體免疫力、提高藥物的療效。
　　五、臨床應用
　　用于預防肉雞常發生病毒病，30日齡左右使用1~2次，可預防或減輕肉雞后期病毒性疾病的發生；
　　用于預防仔豬斷奶前后病毒性疾病，與強力霉素、頭孢類抗生素等合用，避免了仔豬在斷奶后因母乳抗體的喪失而導致的免疫力下降造或造成大面積發病和死亡；
　　植物血凝素+抗病毒藥物+廣譜抗生素可用于治療雞病毒性疾病（如非典型新城疫、溫和型禽流感、傳染性法氏囊病初期、各型傳支、雞痘、染性喉氣管炎），急性病毒病慎用；
　　配合頭孢類抗生素，每月對健康蛋雞進行一次預防，可有效防止蛋雞發生病毒性疾病；
　　植物血凝素配合法氏囊抗體、慶大霉素或丁胺卡那可用于治療急慢性傳染性法氏囊病；配合呼吸道藥物應用可用于治療家禽傳染性支氣管炎、傳染性喉氣管炎等由病毒引起的呼吸道系統疾病；與鴨病毒性肝炎血清或黃芪多糖配合應用用于治療鴨病毒性肝炎；與黃芪多糖和丁胺卡那配合應用，可用于治療鴨瘟。

組別	用藥	死亡率（%）	治愈率（%）	實驗結束時有癥狀雞數（只）
1	陽性對照組	0	—	—
NDV組攻毒	陽性對照組	42．5（17/40）	17．5	16
NDV組攻毒	PHA組	15（6/40）	77．5	3
IBDV組攻毒	陽性對照組	32．5（13/40）	27．5	16
IBDV組攻毒	PHA組	5（2/40）	92．5	1
攻毒 IBV組	陽性對照組	35（14/40）	22．5	17
攻毒 IBV組	PHA組	7．5（3/40）	85	3
攻毒 ILTV組	陽性對照組	30（12/40）	25	18
攻毒 ILTV組	PHA組	15（6/40）	72．5	5
攻毒 AEV組	陽性對照組	20（8/40）	22．5	23
攻毒 AEV組	PHA組	7．5（3/40）	90	1
攻毒 HAV組	陽性對照組	47．5（19/40）	15	15
攻毒 HAV組	PHA組	17．5（7/40）	80	1

時間（h）	Ce—123	NDV-F	PHA	POLYI:C
12	6.0132±0.1054	3.9868±0.1126	4.1245±0.1137	3.7546±0.0314
18	7.3541±0.0946	5.7842±0.0613	6.1547±0.0971	7.8134±0.0134
24	9.7931±0.1542	8.1453±0.1431	8.6457±0.1671	7.2314±0.1148
30	8.1354±0.1125	7.0014±0.1247	7.3145±0.0856	5.4217±0.0841
36	6.2147±0.0786	2.8734±0.0941	2.9863±0.0538	2.5467±0.0452

	30℃	37℃
Ce—132	9．0273±0。1342	9．5381±0。0457
NDV-F	7．9214±0。1496	8．2436±0。1671
PHA	8．1249±0。1054	8．7136±0。1148
POLYI:C	7．0104±0。1215	7．3725±0。1431

	Ce—132	NDV-F	PHA	POLYI:C
高劑量	10．0153±0。0954	4．5868±0。0612	4．1245±0。1137	6．8135±0。0134
中劑量	9．8324±0。1425	6．0134±0。1306	6．7154±0。1097	7．9542±0。1413
低劑量	7．3541±0。0946	8．3217±0。0431	8．8575±0。1134	7．0137±0。1084
最低劑量	4．2514±0。1341	5．7834±0。1004	5．3145±0。0931	5．7189±0。0913

	Ce—132	NDV-F	PHA	POLYI:C
白細胞	9．7312±0。1405	8．1937±0。0978	8．9868±0。1062	7．0135±0。1034
脾細胞	9．5841±0。0964	8．1531±0。1063	8．9004±0。1214	6．9542±0。1013
雞胚成纖維細	8．7931±0。1254	7．3014±0。1431	8．0457±0。1071	4．0137±0。1084

組別	雞只數	用藥	用法
1	40	陽性對照組	不用藥，不感染
2	40	陽性對照組	不用藥，28日齡感染
3	40	PHA組	飲水，連用7日，28日齡感染

畜牧人