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摘要：為了解屠宰場非洲豬瘟病毒（ASFV）污染情況，評估其潛在傳播風險，2018 年 10 月，在湖南省 86 個屠宰場采集樣品 895 份，使用熒光 PCR 方法進行 ASFV 核酸檢測。結果顯示，11 個屠宰場的 43 份樣品呈 ASFV 核酸陽性，場陽性率為 12.8%，樣品陽性率為 4.8%。調查分析表明，ASFV 陽性屠宰場與是否屠宰過來自疫點的生豬及場內環境、工具、車輛的消毒情況相關。調查提示，屠宰場應繼續加大 ASFV 自檢力度，政府和主管部門需繼續加強檢疫監管，以降低 ASF 擴散風險。 非洲豬瘟（African swine fever，ASF） 是由非洲豬瘟病毒（African swine fever virusASFV）引起豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，對染疫國家的生豬產業和相關國際貿易影響巨大，是世界動物衛生組織（OIE）的須通報動物疫病，屬于我國一類動物疫病。ASFV 宿主是家豬和野豬，不感染人，主要通過間接和直接接觸傳播，發病豬、隱性感染豬及其排泄物、污染物以及軟蜱等媒介吸血昆蟲是其主要傳染源。自 2018 年 8 月，ASF 疫情首次在遼寧省發現以來，短期內在全國多個省份接連發現，導致大量生豬被撲殺，經濟損失慘重。2018 年 10 月湖南省發現首起 ASF 疫情，且在 1 個月內連續發現 7 起， 給該省生豬養殖業帶來嚴重打擊。為了解湖南省屠宰場 ASFV 污染情況，在疫情暴發期內，對湖南省疫點、疫區以及非疫區屠宰場開展了 ASFV 監測，以期為評估 ASFV 潛在傳播風險提供參考。 1、材料與方法 1.1、樣品采集 2018 年 10 月，在湖南省 3 個 ASF 疫區市、2 個非疫區市 86 個屠宰場，選擇待宰圈、電麻前生豬通道、放血槽、盛血器、脫毛池、屠宰場總排水溝、屠宰線、肉品存儲庫等不同生產環節，采集樣品 895 份，其中環境拭子樣品 757 份、豬血樣品17 份、豬肉樣品 109 份以及屠宰場內加工的香腸 8份、臘肉 4 份。 1.2、試劑 ASFV 熒光 PCR 檢測引物和探針：由中國動物衛生與流行病學中心提供；熒光 PCR 擴增試劑盒：購自北京世紀元亨動物防疫技術有限公司；病毒 RNA/DNA 提取試劑盒：購自蘇州天隆生物科技股份公司。 1.3、主要儀器設備 NP968 核酸提取儀：西安天隆；ABI 7500fast熒光 PCR 儀： 賽默飛； 生物安全柜： 美國BAKER；高壓滅菌鍋：上海申安。 1.4、樣品處理和檢測 按中國動物衛生與流行病學中心編制的《非洲豬瘟實驗室檢測操作程序》進行樣品處理、熒 光 PCR 擴增、結果判定和廢棄物處置，按照 RNA/ DNA 提取試劑盒說明書提取核酸。 1.5、屠宰場清洗消毒 待宰圈舍、進豬通道、卸豬臺、淋浴間等區域，每循環 1 次，徹底清理 1 次糞便，清水沖洗后 用 2%~5% 燒堿液噴灑，30 min 后再用清水沖洗；屠宰、分割加工車間，每次生產結束后先用清水沖洗，再用 0.1%~0.2% 的戊二醛噴霧消毒，30 min 后用清水沖洗。 1.6、陽性屠宰場檢測 根據《湖南省防治重大動物疫病指揮部辦公室關于因非洲豬瘟關聯暫停的屠宰場恢復生產有關事項的通知》（湘防重病辦﹝2018﹞15號）的規定， 暫停疫情縣以外、與疫點有流行病學關聯的 ASFV檢測陽性屠宰場的屠宰活動 15 d，在此期間進行徹底清洗消毒，分別于暫停屠宰后 5、10、14 d，在待宰圈、屠宰間、放血槽、打毛間、總排水口等 5個部位，各采集 5 份環境樣品，共 25 份 / 次進行ASFV 檢測。 2、檢測結果 2.1、總體情況 86 個屠宰場的 895 份樣品中，11 個場的 43 份樣品為 ASFV 核酸陽性，場陽性率為 12.8%，樣品陽性率為 4.8%。43 份陽性樣品包括 36 份環境 拭子樣品、1 份豬肉樣品、5 份香腸樣品、1 份臘肉樣品，其中陽性環境拭子主要采自屠宰間、放血槽、排水溝、脫毛池、生豬清洗間等位置。不同類型屠宰場檢測結果見表 1，不同類型樣品檢測結果見表2。 2.2、屠宰場清洗效果 1 個疫情無關聯陽性屠宰場（正常屠宰），首次采樣（在待宰圈、放血槽、盛血器、電麻前生豬通道、屠宰場總排水溝、屠宰線、脫毛池等7 個工作地，每個地點隨機采集環境拭子 3 份）2 d 后，再次采樣（7 個環節，每個環節 5 份，共35份）檢測，結果全為陰性。其間屠宰場按日常清洗消毒程序，其清洗消毒2次。另外10 個暫停屠宰的陽性屠宰場，其間共清洗消毒 3 次，每次檢測均為陰性。 3、分析與討論 本次監測發現，屠宰場內的 ASFV 樣品陽性率為 4.8%，場陽性率為 12.8%，表明屠宰環節存在 ASFV 污染。疫情關聯屠宰場陽性率（75.0%） 遠高于疫點縣屠宰場（0）和疫情無關聯屠宰場 （2.9%），差異有統計學意義（P<0.01），表明屠宰場 ASFV 污染與屠宰疫點養豬場生豬直接關聯，這也符合 ASF 高度接觸傳播的流行病學特征。 AFSV 抵抗力強，在外界可長期存活，任何與感染生豬接觸的行為均有引發 ASF 疫情的風險。本次檢測發現的 43 份陽性樣品中，有 36 份（83.7%）為環境拭子樣品，表明病毒一旦隨生豬進入屠宰場，就會潛入屠宰間、放血槽、排水溝、脫毛池等區域，繼而污染整個屠宰環節。如果屠宰場與養殖場之間存在運輸人員、車輛、工具等的頻繁接觸，那么病毒匯集、擴散風險巨大，如果不經過嚴格消毒，就會使病毒進一步擴散。從湖南省屠宰場的消毒監測效果看，通過嚴格和規范的消毒，可以有效殺滅 ASFV。因此，要做好屠宰場內環境、運輸車輛的清洗消毒工作，確保病原在屠宰場內不交叉、不回流。 監測結果顯示，屠宰場豬肉樣品陽性率為0.9%，表明屠宰場豬肉產品存在 ASFV 污染風險，其原因與屠宰了隱性帶毒豬以及屠宰場的病毒污染有關。另外，監測的所有香腸、臘肉樣品均來自于同一個疫情關聯屠宰（加工）企業。溯源調查發現，在采樣監測前，該場多次宰殺來自疫情場的生豬，因此及時開展疫情場的外調記錄調查，追蹤屠宰場的動物產品流向，將有助于降低病毒經產品擴散的風險。 此外，從與疫點養殖場有流行病學關聯屠宰場的環境、豬肉及其制品監測結果可以看出，屠宰場是 ASF 防控的關鍵主體。如果屠宰場屠宰了隱性帶毒生豬，病毒就會進入產品并長時間存活，這會給 ASF 防控和凈化帶來更大困難。因此，建議根據農業農村部統一部署，要求屠宰企業繼續加大ASFV 自檢力度，政府和技術部門加強指導和監督，把好屠宰檢疫關。 4、結論 本監測利用熒光 PCR 方法，對湖南省86個屠宰場進行 ASFV 核酸檢測，在11個屠宰場的43份樣品中檢測出核酸陽性，場陽性率為12.8%，樣品陽性率為 4.8%，表明屠宰場存在 ASFV 污染，其來源主要與屠宰疫情養殖場生豬有關。屠宰場的日常清洗消毒，可有效消除病毒，對于 ASF 防控具有積極意義。因此，屠宰場應加強 AFS 自檢工作，堅持日常清洗消毒制度，阻斷病毒通過屠宰產品再次擴散傳播。 （文章來源：湖南省動物疫病預防控制中心 作者：何世成、王昌建） |
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